人T细胞扩增时可溶性CD3/CD28的浓度？

zerollx

   如题，想做人CD8+T细胞的体外扩增，添加可溶性的CD3和CD28抗体刺激，一般抗体浓度加多大啊？

nailute1985

CD3不超过50ng／ml，CD28不超过30ng／ml

温暖暖

1、用immobilized anti-CD3抗体刺激T细胞活化（即包被），原理是固相结合的高密度anti-CD3抗体可引起T细胞TCR-CD3复合体的交联，直接产生活化信号，不需要第二信号的辅助。也就是说在没有任何抗原提呈细胞（APC)或anti-CD28等抗体的存在下，就可以刺激T细胞活化。
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/ ~1 Z7 |5 [7 G4 T常用包被抗体浓度是5 ug/ml或10 ug/ml，浓度的选择要根据自己的需要。如果培养时间3天左右，希望有很强的增殖可选高浓度，如果培养时间较长则选低浓度，因为高浓度虽然诱导增殖能力强，但活化诱导的凋亡作用（AICD)也很明显。
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( t1 }: b' h! e/ b# B- `% g. |' M2、用soluble anti-CD3刺激T细胞活化，必须有第二信号的辅助。也就是培养体系中要么有APC，要么加入anti-CD28等抗体。因此，分离纯化过的T细胞如果只用可溶性anti-CD3刺激是不能增殖的，但用包被的anti-CD3就可以。* i1 F. R* V: X* Y9 b
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常用的可溶性anti-CD3抗体浓度为0.5 ug/ml 或1 ug/ml。在我手里，有APC存在的情况下，二者刺激T细胞增殖能力没有明显差别，所以我认为0.5 ug/ml 的浓度已经饱和了。Anti-CD28抗体的浓度与anti-CD3一样。9 ]0 ~* s3 t' |5 |

1 @. Q7 e0 a# n7 b7 z' }再次强调，如果想长期培养，除了适当加入IL-2外，初始刺激一定不能太强。

woosheng

回复 温暖暖 的帖子& n( |9 ?* k- |! w0 Y
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请教下，soluble anti-CD3刺激T细胞活化时，用的不是分离纯化过的T细胞，而是PBMC的话是否只用anti-CD3（不用anti-CD28）就可以激活呢？

xuanyalizi

回复 温暖暖 的帖子6 x" z+ w) V/ w
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LZ解答非常专业，同问这个纯化后的T细胞是指经过分选后的某一亚群的T细胞吗？另外可溶性抗体的浓度是不是根据品牌不同会不一样吧，个人经验超过0.5ug/ml 就完全饱和了，50ng/ml左右的浓度效果也不错