免疫荧光染色步骤 越详细越好

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免疫荧光染色步骤的文章或视频     越详细越好 谢谢

moluxingke

看文章看视频，真不如在自己详细了解相关原理之后，动手做上一遍。然后再把遇到的有关问题请教其他人。

jenny114402

免疫荧光分为胞内核蛋白和表面蛋白
5 ^! n5 g% U* A5 \+ B核内蛋白染色步骤：. \) h6 _+ |$ C" K1 J. x) B7 K
1.在24孔板内接种细胞，1ml培养基培养，待细胞长到30%-50%染色
9 p' `2 A. T! O& S6 W3 e$ t2.吸弃培养基，PBS洗两次
. A- k: x- ]  h; n4 V' {" L3.4%的多聚甲醛固定25min
" [8 o$ a. r$ N' h* \' C" ^' k4.PBS洗3遍) u# K9 d: g' a4 z
5.250ul 0.25%TritonX-100，室温20min
& \6 u8 }* _& v7 @' P% U% a3 M1 o" n6.PBS洗3遍
0 @9 o, f5 j8 C, o. V, V7.200ul 10%的山羊血清，室温封闭30min' Q$ j  n6 @  N1 c- X; H3 j2 w# S& c
8.弃封闭液，加一抗，避光4度过夜4 k* d8 S6 [3 n
9.PBS洗3遍6 c5 \! o' b" V: {0 u, H6 \' Z
10.加二抗，避光室温2h
$ T* x$ Q9 D: K, f11.加稀释好的PI/DAPI，避光室温20min
- {) |* P! J/ I" v4 l) f12.PBS洗3遍，镜检。

jenny114402

表面蛋白省去TritonX-100打孔

1195963542

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1 J9 N! \$ h! @1 q7 ~2 O( `
OK  * H! G0 v& r# K7 y& t0 Y0 l

倒腾细胞

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: v9 C9 e  Q: p: c+ b. r/ B7 y
. u  o7 P+ V. p! }! W7 k请教前辈 细胞量有没有讲究  现在在六孔板培养大鼠MSC 过几天想做免疫荧光看细胞fibronectin和iNOS的表达  第一次做没有任何经验！细胞爬片又是有什么用处。

jenny114402

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/ s# }8 n) k; F
; x# T$ H4 G, l/ K) E我做的是人的MSC，细胞量是5*103， 第二天做的免疫荧光

jenny114402

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; \; i3 N& l5 [
3 N) g8 v9 r& l细胞爬片就是那个玻片是包被过的，有强吸附能力；说白了就是细胞不易洗掉。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子- L1 K% W. [: D9 o" S

, j( i, O* \0 d% a我说的是5*103是24孔板的细胞量，我们一直都用24孔板做免疫荧光，检测mark有点多

倒腾细胞

回复 jenny114402 的帖子3 y1 ^' d) X9 E1 G$ d  A" y+ t

! n7 v% \- |% k+ a2 }0 P: q2 T我得先用六孔板做transwell间接共培养24h  之后打算接着就用六孔板做IF  不过貌似细胞数量就很多了。。。。。难道要24h再消下来重新计数接种到24孔板吗？