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目 录. O& G6 _, f3 M) R
转染选择指南和转染决策树 . . . . . . iiii
7 V/ R: `7 K4 }4 C+ B5 P1. 简介 . . 1
+ G: v" W! }: R3 E$ h. c/ I( k9 h2. 转染基础知识 . . 2
0 z/ ~- ~ S. x! L9 d4 a转染介绍 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
9 K3 @6 [! {( _什么是转染 2. D+ K2 \& G! c- N
术语 2/ P% Q# _9 U3 l0 c+ M2 w
应用 38 {6 `! K7 l8 |( V) }5 m! b3 [
转染类型 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4
8 H3 m; X1 ]& U2 h" T$ u瞬时转染 4
* t6 }: g+ n& v7 p- d1 G+ c稳定转染 4
1 ]* `- b4 @2 V8 ^4 e选择转染策略 . 5" y$ ~' E. j1 _3 w) h- K$ r% D
基因输送技术 . . 72 e3 i" w4 W' n) P- O' K
阳离子脂质体介导的输送 9
: }& ]0 {$ ?# t2 K2 w磷酸钙共沉淀 10 `4 H0 U' j9 j! d. u# l: z# A8 l
DEAE-右旋糖酐介导的输送 . 11
7 a& L* ] S: K G" X0 J8 S其他阳离子聚合物输送 . 12
x N) W" q0 R, [+ u+ ]病毒输送 13$ W' m) L [$ Q0 r5 }
电穿孔 . 14" p& }' v1 f. L5 y" o' `
其它物理输送方法 . 15
\4 l) L& a! |0 P& H- y* Q阳离子脂质体介导的转染 . . . . . . . . . . . . . . 167 ?- L0 H/ g u# V3 G) z0 H
机理 162 @5 b5 a, J5 J* h, J, z" e
阳离子脂质体转染试剂 . 17& Q2 L' u9 A- @) m& ?' A
病毒介导的基因转移 . . . . . . . . . . . . . . . 19( V1 a, r! k3 F% Z
病毒载体的主要特点 . 19
4 J8 T9 d r+ v: z/ s/ \* {常用病毒载体 19) b$ C5 _& R" m: R5 A* ], W
Neon®转染系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 213 i4 a. M) C. |' t
稳定转染子的选择 . . 232 Z& r4 B. W7 E, A# c/ x3 {
用于真核细胞的选择性抗生素 . 23
8 h: f* g- S) [/ ]% G报告基因分析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
/ e" D1 C0 c* j3 ^2 m: `转染分析 24: S" `3 @- B/ \* c, Z! i4 ?* n
基因调控分析 25
; M; Y0 k% Q2 B+ c- x" T Y( o/ n7 v常用的报告基因 25 Z( _+ x3 C" u ^6 n
RNAi和非编码RNA研究 . . 26( ]+ {8 e* v; M7 f+ y
常用RNAi术语表 . 269 u, ?8 d! D! D1 d3 Q; Z. l- i
RNAi工作原理 . 27
4 @6 ^1 _: f# t; h8 G8 @+ AsiRNA分析 . 27
- v1 c( c, E, MmiRNA分析 281 J! b5 G1 i" {' I1 V% k
选择RNAi方法 . 296 f" ~( g$ L: z4 s
3. 转染方法 . . . . . . . . . . . . . . 30
- S6 M2 @. f1 L影响转染效率的因素 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
. b" j" [; \$ O& k# Y! r2 S细胞类型 30' K( n5 ]# N( X f
细胞健康与活性 31
2 \5 _) k6 I+ p8 w+ c6 {汇合 . 32. U7 ^6 D' {* H; m ]
培养基 . 32
" j6 _' M8 I1 M; \% ^血清 . 32
" A1 K5 E* q! W+ d' n抗生素 33) r5 M9 I6 [: L) M! ]
转染分子的类型 331 s' Y7 o, v2 Q. @! a% J1 y
转染方法 33& k$ `( W& H3 ^
选择转染方法(非病毒) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34
( [ [9 p J: f: N: S4 c" e连续细胞系 . 341 x7 U, a* I9 w* w8 _5 Z& x; Q2 {" {
原代细胞和有限培养物 . 35
& c3 u3 T* C0 o选择病毒DNA输送系统 . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36, o6 L' S0 ]" q8 u: r+ q
哺乳动物细胞表达系统 . 36
@5 i5 T0 A3 n昆虫细胞表达系统 . 37
. n& K' }) |4 f' `2 u0 N质粒DNA转染指导原则 . . 38+ D. \& M( b7 ^4 W: K+ `2 _$ e' u
载体考虑因素 38
F8 ]" Z9 O' s [4 D质粒DNA的质量 38
& j) `) ?* J7 A6 c ~基因产物和启动子 . 393 y6 z6 F0 F( ^2 {0 W
对照 39; E" Y/ s2 K) s7 H! i
质粒DNA转染的优化 . . 39
a/ ?6 q. Y j, v% @磷酸钙共沉淀的考虑因素 . 40( ?# c U+ `0 r) v) ?+ E
阳离子脂质体介导的转染考虑因素 415 Z1 F0 {7 q1 e* }* O, Z
电穿孔的考虑因素 . 43
0 p% W8 H% c8 A稳定转染子的选择 . . 44+ }; t1 n0 R& w% v( C1 ?
开始前 44/ m8 n9 U b! _7 r
杀死曲线 44
- K& \; I' W z/ w' Q选择工作流程 44! Z- R* V, W1 f0 F
选择RNAi策略 . . 46
: d; Y K; b9 s$ \4 T8 s; usiRNA与载体方法 46
- R5 d* M- N2 I9 s5 K; `0 L非载体siRNA技术 47
+ r. l h( A8 A* G% VsiRNA转染 . 49; x( a, K& x V* L; e( K& B0 V9 }: O
载体介导的RNAi . 50
" X2 }( r0 v. w5 \: r( Z! ~6 [RNA转染指导原则 . . 51
& |1 f8 s* z$ w _6 M. M1 K* ARNAi工作流程 . 51# N1 Q2 ?# p2 `* f) M
RNA处理 523 N5 Z9 R4 D4 k* O1 X* L
转染效率 52. M9 [( x& U: m ^
阳性对照 . 52& |- [& ^) r: q, d7 [
阴性对照 52
) O# j! K7 l3 A1 H共转染 53
$ t0 W; ^/ B9 U/ P0 U; I, SsiRNA质量 . 53! U8 ^* Y' H2 P; y( K0 L7 e
siRNA用量 . 54 r( ~% e2 n: Q* t9 C; I. G+ |
转染试剂的体积 54
$ Y8 r/ E! N9 M2 }细胞密度 54
* D$ A3 y0 j7 r- q. v( h& u暴露在转染试剂/siRNA复合物中 . 54
4 w0 n p; @* Z" r4 K# i- w转染过程中存在血清 . 554 C# N! Q, N+ y/ k/ J8 x
siRNA实验成功的技巧 55
0 v/ j3 O- q' k/ }siRNA转染优化 . . . . . . . . . . . 560 a8 r( x. W y# X* _2 H7 W
影响siRNA效率的因素 56 J6 C$ i! [# t7 N6 A+ X _
附录 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 57
8 \4 m$ Q8 X5 ?- y. J5 b- D6 w转染产品列表 . . 57
% u9 v! R3 R, I- ^8 b转染试剂 57 }' q: E& H; e6 I
Neon®转染系统 . 58; c3 ]" X9 Y/ q/ M# n5 I' ~
RNA干扰 58
+ S3 e' v2 ^! `参考文献 . . . 59
/ c/ V* h- R5 p2 x" e |
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发表于 2015-7-9 09:28
