【跪求流式大神】分选的流式图总是shift - 实验室综合讨论区干细胞之家



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楼主: w343989328	go [请教] 【跪求流式大神】分选的流式图总是shift [复制链接]

zz091115

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楼主

发表于 2015-3-10 09:20 |显示全部帖子

和机器补偿什么的没有关系是细胞本身的原因你做的应该是上皮类细胞如果是血液系统一般就不会

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沙发

发表于 2015-3-10 13:46 |显示全部帖子

刚才没仔细看你的实验你是两步法一定要用IgG做对照另外没人有Ho33342区分死细胞 Ho33342是做SP用的活死细胞都能染上的你需要用DAPI或是7AAD 调阈值对于信号不会有任何影响只是机器把输出信号小于阈值的部分不显示不记录而已问题在于原代细胞不是一个纯的细胞群体所以斜角问题和粘连很严重你可以用FSC-A FSC-H 来区分单细胞和粘连群体你去看看文章做上皮细胞的比如肿瘤都是斜向的所以没关系不用担心做好对照就OK了

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藤椅

发表于 2015-3-10 13:46 |显示全部帖子

刚才没仔细看你的实验你是两步法一定要用IgG做对照另外没人有Ho33342区分死细胞 Ho33342是做SP用的活死细胞都能染上的你需要用DAPI或是7AAD 调阈值对于信号不会有任何影响只是机器把输出信号小于阈值的部分不显示不记录而已问题在于原代细胞不是一个纯的细胞群体所以斜角问题和粘连很严重你可以用FSC-A FSC-H 来区分单细胞和粘连群体你去看看文章做上皮细胞的比如肿瘤都是斜向的所以没关系不用担心做好对照就OK了