h1和h9的培养区别

wangxiang

不知道大家在养什么hESC,我手里有H1和H9，但是感觉H1没有H9好样，而且这两个的最佳消化时间也不相同，不知道有没有小伙伴是养这两种细胞的，传代或是消化的时候有什么心得么？我是用EDTA消化的。

hyde

H1确实会容易分化一些，很多文献都使用来做分化实验，注意及时去除分化的细胞。我使用4型胶原酶消化（feeder）一个小时左右，看酶的新鲜程度。中性蛋白酶（feeder free），半个小时左右。

wangxiang

回复 hyde 的帖子+ K6 N0 n& t, f

2 Q2 p7 P' L7 `1 J4 Y恩。我们是feeder-free培养，用EDTA消化3分钟就可以了，感觉H1的克隆总是没有H9长的好，分化的话还是比较少见，就是传代后的H1总感觉形态很差。

缥飘实验员

H1,难养啊，我们是feeder-free培养，用的 protocol 是 stem cell 的mTeSR1 培养基及培养手册，用dispase消化6分钟就可以了，感觉H1的克隆总是不圆滑，分化的话还是比较少见，你们做鉴定没有，我这边做了 sox2 oct4  nanog ssea4 tra-1-60  ，现在 nanog 一直是弱表达，求分享培养经验

wangxiang

回复 缥飘实验员 的帖子
# f) j7 N0 Q1 F; f0 q$ r% G5 D( h( ^, w/ s& D7 S; c# _$ a" l2 V$ D0 P
H1确实比H9难养我觉得，我们用的是E8体系来培养，细胞系的畸胎瘤、核型、染色都是没有问题的，过年之后再复苏也没什么大问题，估计还是细胞系的问题吧，nanog我们1:100稀释没有问题染色，你们用mTeSR1在培养上应该扩增更快吧，毕竟有BSA。

缥飘实验员

5 x5 P& F/ I7 ]$ ?. n, C; g
, {3 ^1 J- K+ w* y. D2 L& v+ o
回复 wangxiang 的帖子
4 t  m3 M; Y( O( \4 G+ d7 S9 \- @0 b
现在只做了这几个 marker 的鉴定，都有表达，核型没有做，畸胎瘤在准备，这个细胞以前用单细胞 accutase 来做老分化，现在改用 dispase 克隆团培养方法，基本上没有分化，但是克隆团的边缘不光滑，D2-D3毛刺边缘严重，D4-D5（一般四到五天传代）倒是能缩回去，那种毛刺边缘免疫荧光鉴定过，不是分化，估计就是一个扩增的特殊形态。现在很纠结这个形态，不是的是不是细胞系的问题，或者以前冻存的就有问题。图传不了，你能不能把你培养的 H1图片传二张给我。

wangxiang

回复 缥飘实验员 的帖子( {2 U4 H0 h4 _

1 I; l5 o4 p6 Q不知道你们其他细胞系怎么样，我们养iPS情况就很好，细胞系只要鉴定没问题，多传几代调整状态就没问题了应该，刚传或刚复苏估计都不好形态，养几天就好了，我们是0.5mMEDTA传代，复苏用的商品。

天龙八部

回复 hyde 的帖子
5 k+ o7 a- \# ?& E. F
+ p. g+ g* B* F0 ^3 G你好，请问你是怎么么去除分化的细胞的？

细胞海洋

回复 天龙八部 的帖子) s0 g- f" r/ ?. f

$ S1 E' ]' e/ m* H建议你发新帖提问

hyde

回复 天龙八部 的帖子& T+ ?# S9 A/ ]: |: k( V9 o- u' J( V

  ]& [2 K  @  k& L7 E: A3 Z在显微镜下用marker笔将细胞划出来，用枪头戳掉