请问WB封闭到底是BSA好用还是奶粉好用？

aulenuyah

回复 yinchong42 的帖子
6 F  v/ ^6 t% b+ V7 z1 p3 j3 _% ]* O/ p; s$ H
个人感觉， 最好事先试验一下，每个抗体都不是很相同

wuzhoulingxiao

奶粉里面含有磷酸酶，会将含磷酸基团的蛋白给去磷酸化，所以做WB还是建议用bloking buffer，效果是最好的。

tiramisu

我们实验室做WB也都是用的脱脂牛奶，杂带也很少。没用过BSA。

sc-cxw

我们通常也是用5%-10%脱脂奶粉。

妖妖空

以前的时候每次都用牛奶封闭，后来发现不封闭也没有啥影响，后来就去查了资料，之所以封闭，是因为以前NC膜的工艺问题，后来的工艺进步后，基本不需要封闭了。所以我现在做WB都不封闭了。但是要是检测抗体效果的话，当然还是封闭一下号。做DB的话，是需要用BSA封闭的。

yeshch

我们实验室都是用的5%脱脂奶粉，效果很好；不但较便宜，而且四度保存可重复利用两三次；BSA一般做免疫荧光或者组化时采用

yinchong42

回复 妖妖空 的帖子; U* Z0 O6 P" C$ \
& k- U! T4 }5 u" D2 A! R% V
非常感谢你的经验，我听说中山大学那边做wb也从来不封闭，不过就我做的经验来看，不论一抗还是二抗，抗体孵育的时候不加奶粉就会有杂带，不知道你们是否也有这种情况？

yuanyecat

1.从价格方面考虑，脱脂奶粉便宜，而BSA的价格很贵。- ]+ ]0 V. ]1 c0 p% a1 G  F8 g# Z
2.从封闭效果来看，两者效果相当，但是BSA的封闭效果更好，个人经验。
' F$ u0 h; i9 T综合两点，所以国内很多做WB时，都才用即经济又实惠的10％脱脂奶粉。

chenchunlei

回复 yinchong42 的帖子
$ J. z7 m8 o' C! M8 j5 e9 c/ ]. D$ L; j" G
我们硕士期间全部用BSA
  O9 c, ]# i0 L1 s! I4 l

daviddow

5%牛奶