胚胎干细胞负筛选问题

gscao

请大侠回答问题
5 q, Z3 x# j, A/ A, J8 ~    小鼠胚胎干细胞基因打靶常用的负筛选有哪些？最好打靶筛选后不影响生殖系嵌合的负筛选方法，谢谢！

genedu

按照最先利用正负筛选系统作为提高基因打靶效率的实验之一，用tk基因作为负筛选绝对没有问题，相对用的药物是FIAU，小鼠胚胎干细胞的筛选浓度为0.1uM（参考）

gscao

非常感谢！我还想问楼上，FIAU和GANC都可以用吗？还是用FIAU更好，能否告诉公司？另外，donor载体必须线性化吗？我在有些文献上看打靶载体不一定线性化。

genedu

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* a* _; L3 ~' I6 A: x" Y
: w( E: J; S6 r! w6 a: M6 Z您好gscao，首先，您在我的帖子上点回复我才能看到。FIAU还是比较好用的，最起码在我们实验室用FIAU绝对是没问题的，公司用的是Moravek Biochemicals and Radiochemicals，M 251 1-(2-Deoxy-2-fluoro-ß-D-arabinofuranosyl)-5- iodouracil。一般是需要线性化的，那样效率比较高，但是不能一概而论，建议两个都做，择优而行

gscao

genedu，您好！您的建议很好，非常感谢！

细胞海洋

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; a5 q' h* q; S4 X' e/ y5 r, i& W) C2 O, P; G/ S" ~* W4 c
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
% ~6 u, `( Y7 S; [' A1 o5 ?9 N3 ]8 i& W) j6 D
否则他会看不到( z; W% M$ d5 |3 s9 r9 o% K

gscao

回复 genedu 的帖子% K* t( ?. L, R, z3 t" R1 s

- Z5 k; v  k; P( pSigma公司的FIAU可以吗？你建议的公司FIAU很贵啊。

genedu

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- z3 j0 a) K# n! l
! G' V  q* j& f可以的，没问题

gscao

回复 genedu 的帖子5 e: R/ k# T0 c' k
% {# H+ s. g3 O4 B/ g& \! R( v
Thank you very much