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(1)给予大鼠0.3ml/100g的10%水合氯醛腹腔注射麻醉。剪去胸前区和部毛发。用碘伏消毒两遍。) D3 Z& ~$ H' X" n& `) R6 {
(2)在相当于颈6水平横形切口剪开颈部皮肤,分离皮下组织及肌肉,露气管。用22号套管针行气管穿刺,进入气管后,拔除针芯,连接动物定压呼吸机。行间歇正压通气,频率为50~60次/分,调节压力见到胸廓起伏为准。
; {9 \$ k9 G" w: G6 i/ n @(3)沿胸骨左缘3、4肋间逐层剪开皮肤和皮下筋膜,撑开肌肉,断第肋,打开胸腔,剪开心包,露出心脏,用4号小圆针及0/5丝线在左耳下缘约5mm处结扎冠状动脉前降支。) M D- h6 _4 l
(4)观察20min后,左心室前壁颜色变苍白,收缩力减弱,认为心梗模建立成功。在心梗结扎的下方左心室的心梗区边缘区分5点,用微注射器在心肌浅层注射2×106个已标记的BMSCs(50ul/点)
' g! O/ p y; O! I+ J(5)观察没有出血后,关闭胸腔,在切口上撒青霉素粉预防感染,再关肌肉及皮肤。逐层关闭颈前区切口。待呼吸平稳后,拔出气管插管给予低流量吸氧2小时。术后连续3天腹腔注射青霉素8万U/只。( z" b2 h( t) G5 G
2. 移植细胞的观察
, S0 [# w1 R5 u4 t" ^! }9 W2 Z# F分别在细胞移植后1周、2周、3周和4周,每次取2只大鼠心脏,冰冻片,在荧光显微镜下观察移植细胞。- R" {9 i* Q( v0 m( G
(l)大鼠0.3ml/100g的10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,剪开胸腔,取出心用冰冻生理盐水洗净。
9 C( U9 k- C4 @(2)将心脏用胶水包埋后,放入冰冻切片机冷冻,约15min后,进行切切片厚约为8μm。/ B. H: _& R3 F" F
(3)将切片放在一20℃的丙酮中固定15min,再用PBS洗3次,5 min/次,避光保存于一20℃冰箱中。5 [+ i) t/ z5 f A4 @; x( _
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