包被方法诱导NK细胞的可能性！！！

大海之家

大家好，小弟现在在做NK方面的研究，有文献报道，单纯依靠可溶性细胞因子如IL-15，IL-21，IL-7，IL-18或者单抗CD137等是很难诱导足够数量的NK细胞的，所以我想采用包被的方法。单抗和这些细胞因子容易包被在培养瓶吗，不知道大家有没有做过类似实验呢，欢迎大家指点迷津！不甚感激。

weijunning

可以用包被的方法。我们一直用包被的方法。

zhenhuale

抗体可以包被，其他细胞因子不容易包被

大海之家

这个是我有疑惑的地方之一，看了很多文献，都说NK诱导单靠可溶性细胞因子是很难大量扩增的，固相刺激反倒有些效果，我打算用CD137和IL-21联合包被，IL-21 1000U每ml，看看效果。另外，大家是用专门的NK分离液分离NK，还是用淋巴细胞分离液分离?有没有使用专门的NK培养基培养NK呢？

大海之家

回复 weijunning 的帖子) Y! @6 r0 z3 x6 n

) g: i# z  H7 X6 u* H9 D7 r( j# ~) C这个是我有疑惑的地方之一，看了很多文献，都说NK诱导单靠可溶性细胞因子是很难大量扩增的，固相刺激反倒有些效果，我打算用CD137和IL-21联合包被，IL-21 1000U每ml，看看效果。另外，大家是用专门的NK分离液分离NK，还是用淋巴细胞分离液分离?有没有使用专门的NK培养基培养NK呢？

大海之家

回复 zhenhuale 的帖子3 p7 p) ]2 p0 [4 \3 ?% ~' b$ M' P& w
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有没有其他你觉得可以的方法？你们做的数量和表型能达到多少？
2 F. x3 z- ~2 Q" ?% K) n' g; B

zhenhuale

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: U, p% }% b! U9 c1 C4 o+ i4 {7 D6 n9 Y1 w- b4 Z1 ~  G- a! f; b
我们做的NK数量不多，50ml血可以做到20亿左右，纯度在90%左右

大海之家

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. I$ l4 P! j: ]3 _你们NK是如何分离的？是直接用PBMC培养，还是使用分选系统进行NK的分选？

weijunning

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7 e; G! g4 Q: E  S; m- f4 ?7 b$ h没有，我们就是使用普通的淋巴细胞分离液进行人外周血单个核细胞的分离，之后再进行NK培养。NK细胞培养基很贵的，大约2500元/瓶，500ml/瓶。

大海之家

回复 weijunning 的帖子: F1 w5 I1 k, g" d
: J4 c4 c' m+ M1 k
能分享下你们大概的一个培养方法吗，比如说采血量是多少，培养基总的体积，最终的培养数量是多少等等，另外，使用了这种培养基的同时还需要对细胞进行前期包被处理？