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“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物,“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。8 }' r; @* s) l5 Z& n
“黑胶虫”可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,开始时对细胞并没有什么影响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候, 细胞生长就会受到影响直至死亡,严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断,尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。% X( ?/ g- Y) q4 Y# w( ]
目前比较公认的观点认为“黑胶虫”是一种微生物,增殖缓慢但对细胞有损害,数量达到一定程度可引起细胞死亡,其来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的。该污染在全世界细胞实验室中普遍存在,解决该问题是一个世界性难题
8 s; r2 ^0 T& y2 G" s ?; p ?关于是什么的问题的讨论
/ `) c- t! r# T, b: e& `A. 玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西(曾经有文献报道过)
/ N# U( Q: ?% n" ~1 c. A. R; u uB. 据说这是黑胶虫,又有人说是原生动物,好象也没个统一的说法+ V/ O9 r f' S$ P! D1 ~& T
C. 据病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫,似乎和草履虫和变形虫有类似之处,然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。% D( d" T6 c$ D2 }* n
D. 有人说是纳米级的细菌
& p' R" p. o2 Z2 Z3 i e其他的特点
& ?, D+ w& s! T: a% q(1)形态上有些像细菌,直径约在0.5~1微米,
, s; V9 w+ p: v/ m& W- J( h(2) 在400X倒置显微镜小,有典型的布朗运动(不规则的原地小距离抖动)。: E, r& u3 h" w& @( `
(3) 细胞内好像也有存在,' b8 r$ F: ~" l0 s+ _. z
(4) 但并不引起培养液混浊
* [; k3 H" b- ~ E* u, c! s(5) 时间稍长,细胞状态明显恶化,并最后死亡8 w6 b9 ]2 k8 G4 q* ?, V o3 {$ g
大家的处理:
: O1 P5 _6 _$ D: Z+ K& ` h9 {" h1.换好一点的血清(我觉着和血清的关系不大)。
8 }( w6 A' M9 F) F$ m2 ~1 o2.如果是贴壁细胞的话,可用无菌的PBS洗几次,可一定程度上缓解。若是悬浮的话,就不太好处理拉,可以向其中少加一点滋养细胞(从小鼠腹腔内取的巨噬细胞,这种细胞不分裂,过一阵就死掉了,做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道)。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效!还有就是实验环境要注意好,保持细胞间整个环境的洁净度。
% a% y% Z: D, }2 w5 K3.换用进口的一次性塑料培养瓶。
8 _' F/ q/ ? h! \0 a# u; y+ K4.建议清理无菌室所有物品,重新灭菌,用KMnO4熏蒸,按首次使用无菌室做,细胞重新复苏,。
6 Z1 K; z# D& r/ u9 u5. 在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打,冲洗干净后再加入培养液,坚持天天洗,传代时加生理盐水再离心一次,接种密度稍大一些,一段时间后,虫子就会大大减少,对细胞的生长也不会有大的影响。( U8 P/ n8 ~3 l) e* ?
6.有材料称minocycline具有一定的作用,可以和换液结合起来使用。
0 R9 x' x* n5 G9 x以上是在网上看到材料,另外我还看到过如下的解释:
$ |" V' r% }! E# m, U: a& _黑胶虫即显微镜下观察到的“小黑点”,通常经过热处理的血清,沈淀物的形成会显著的增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”,常会误认为血清遭受污染,也就是我们所认为的黑胶虫吧,而将血清放在37℃中欲培养此“微生物“,但在37℃环境下,又会使此沈淀物增多,更会误认为它在增殖,但以培养细菌的培养基检测,又没有污染。所以所谓的“黑胶虫”很有可能只是血清中的产生的沉淀物。
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