关于感染细胞后外源基因检测的问题

我爱火热的冬天

我的载体上没有荧光标记和药物筛选，现在只有空载体包装的病毒和目的基因的病毒，我该如何进行下一步筛选，感染细胞后，如何检测外源基因的表达？

我爱火热的冬天

回复 cyberpig 的帖子7 o9 e* ?% ~9 X9 `. ^+ q
' `$ G! X1 |" ^
谢谢，不过我的载体上没有tag，我是做ips，想检测外源基因的表达而已，做wb是一个好方法，只是还没做过，下次试试

我爱火热的冬天

回复 懵懂干细胞 的帖子
6 N& i! n8 ~2 Z
- `3 E8 B# f- ^) c. {6 |7 f! W有道理，谢谢懵懂版主。

懵懂干细胞

回复 我爱火热的冬天 的帖子/ Z& \9 ]- R% V3 i: d
& }5 M6 ~, ~0 V2 X& `* j
看来楼主对自己的病毒感染率很有信心啊，我只能说如果你的感染率真的平时每次都能维持在85%以上的话，基本上后续检测就是确定一定外源基因的表达而已，如果没有的话，建议做个FACS检测，可以计算出比例的技术，如果你仅仅是RT或者WB检测的其实你只是检测出外源基因有没有表达，那怕感染效率20%甚至更低也有表达的。

cyberpig

那載體上總會有fused的tag吧，就好像HA，myc，那些，你可以用它們的抗體做western。如果你有目標protein的抗體，你還可以直接做。你可以轉染後收24，48，72和96小時的細胞來跑western,然後看看哪個時間的表達最高來做後續實驗。如果你只要筛选stably transfected的細胞，那就一定要antibiotic resistance gene了。