肿瘤细胞裂解液制作

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手术切除肿瘤标本，无菌条件下，将坏死组织和癌旁非肿瘤组织去除干净；' D8 B0 Z. G& h+ j0 f
无菌生理盐水洗3次；
& c$ }& N0 d, D# d9 K+ Z4 k用无菌的组织剪将肿瘤组织剪碎，加入RPMI 1640培养基，充分研磨；. k# m0 Q' s  Z, K, V
200目无菌网过滤后收集单细胞悬液；
: C$ B( Z% J4 d% z用RPMI 1640培养基重悬细胞至1-2 x 107/ml，装入5ml无菌冻存管中；! W5 q  y" {9 o! m% l0 U
将冻存管浸入液氮中速冻，10 min后取出，再迅速放入37℃水浴中解冻10 min。反复3-5次；
$ F- I: U9 k6 j6 G: q注：也可以-80℃/37℃反复冻融3-5次。
6 e5 z, v' C) o$ Z# j' E将肿瘤裂解物加入离心管中，3000rpm，离心10min；收取上清，0.22mm滤膜过滤除菌，留样检测蛋白含量及细菌、真菌和支原体；-80oC保存备用。. t# E: [" F$ v" W

8 B* H# L* ^" Q以上是查到的方法，请各位专家帮忙查看是否可行，尤其是在零下80度和37度反复冻融取代液氮反复冻融可以吗？另外还需要注意什么？最后检测蛋白含量是检测什么蛋白？