肿瘤细胞裂解液制作

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手术切除肿瘤标本，无菌条件下，将坏死组织和癌旁非肿瘤组织去除干净；* X+ f) W  F0 @, y+ _- d$ u
无菌生理盐水洗3次；
" T3 W/ o' |" W. N" B4 x, X用无菌的组织剪将肿瘤组织剪碎，加入RPMI 1640培养基，充分研磨；
! r1 H& O) E; {5 v200目无菌网过滤后收集单细胞悬液；8 T  m2 y9 L! _: L
用RPMI 1640培养基重悬细胞至1-2 x 107/ml，装入5ml无菌冻存管中；
% L9 @' ?8 H& O- }将冻存管浸入液氮中速冻，10 min后取出，再迅速放入37℃水浴中解冻10 min。反复3-5次；
  T6 N2 i2 x" E. Z9 g- y! i" }! z4 {5 j注：也可以-80℃/37℃反复冻融3-5次。9 N2 C: m% ?8 e* m! Z
将肿瘤裂解物加入离心管中，3000rpm，离心10min；收取上清，0.22mm滤膜过滤除菌，留样检测蛋白含量及细菌、真菌和支原体；-80oC保存备用。
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以上是查到的方法，请各位专家帮忙查看是否可行，尤其是在零下80度和37度反复冻融取代液氮反复冻融可以吗？另外还需要注意什么？最后检测蛋白含量是检测什么蛋白？