CRISPR/cas9系统中gRNA的设计

runsong

CRISPR/cas9系统中gRNA怎么设计啊
) B; k" l3 O- h& J6 R3 \我找的文献说得都不具体9 W, t4 |5 S$ h, z9 z2 y
有没有详细一点的步骤？

chips100

参见addgene，说的还算详细。
9 R) W9 y. A4 g1 l( x  v0 e7 ]: G另，能惠赠 CRISPR/cas9系统质粒吗

chips100

http://www.addgene.org/CRISPR/& \2 ^, d) p- S9 p5 W
直接给链接，貌似zhang的比较好

quanri1126

根据zhang的site    http://crispr.genome-engineering.org/  选就行了) [5 P8 G  l% j* B' {
exon上的位置 GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NGG  中间20个随机碱基 G+19个N 可以选作一个target  最后的NGG是PAM site # F: n% ~' [7 w0 v+ G
再有根据不同的plasmid 可能长度不同 我买的zhang的plasmid 刚开始做 有问题一起讨论吧

chips100

quanri1126：求惠赠质粒

quanri1126

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. J% ~9 m# S8 a( F. L9 T+ T
% Y+ X# Y4 V7 T我不在中国，而且从addgene 买也很便宜 运费加上质粒不到1000块钱

cywjswsky

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% }* l( ?2 \; h# \! S2 G- @- v, I7 O
; ?6 w4 ^! ~5 [7 `* r2 X求详细构建之过程

milanello11

回复一下

小桥流水

回复 quanri1126 的帖子* b% V* [& f& Z) K
0 N; \2 H2 I; F' V. g4 V
我想问一下，为什么中间是19个碱基呢，如果21个会怎样

小桥流水

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( X. \6 P; Q: X4 x9 g" o. F
/ }- e& h3 B2 I* ], i你好，我想请教一下，在cas9中，设计gRNA引物时,用T7启动子，为什么要求靶标序列满足GGN19GG的条件，，还有为什么中间一定要求是19个碱基，如果不是19个会怎样，，还有如果我的基因里面找不到满足这样条件的序列，那该怎么办呢，跪谢，赐教！谢谢！