CRISPR/cas9系统中gRNA的设计

runsong

CRISPR/cas9系统中gRNA怎么设计啊. }7 D0 k9 I# J. R/ i9 a- {2 G0 t
我找的文献说得都不具体
3 V. r, j, c' k# e* p有没有详细一点的步骤？

chips100

参见addgene，说的还算详细。% @" R' v2 j: w0 c
另，能惠赠 CRISPR/cas9系统质粒吗

chips100

http://www.addgene.org/CRISPR/
* }! j. H4 o* m9 y) b5 A/ ]) S直接给链接，貌似zhang的比较好

quanri1126

根据zhang的site    http://crispr.genome-engineering.org/  选就行了
( n( ^* R2 i1 D( D$ a0 m" M! y( eexon上的位置 GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NGG  中间20个随机碱基 G+19个N 可以选作一个target  最后的NGG是PAM site
# O5 R2 s3 P/ e, s& Q5 C再有根据不同的plasmid 可能长度不同 我买的zhang的plasmid 刚开始做 有问题一起讨论吧

chips100

quanri1126：求惠赠质粒

quanri1126

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' v7 \8 E7 t: j& j' A9 D9 M( Z3 N, s
我不在中国，而且从addgene 买也很便宜 运费加上质粒不到1000块钱

cywjswsky

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/ D& E% \/ g! D  G( |
求详细构建之过程

milanello11

回复一下

小桥流水

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- e' n: i3 Q% H$ n7 h9 m3 w" D( @9 a" a0 z+ K+ ?! h
我想问一下，为什么中间是19个碱基呢，如果21个会怎样

小桥流水

回复 quanri1126 的帖子) Y: T; q8 y" c$ S1 T
. f3 N+ e- H) p4 ^
你好，我想请教一下，在cas9中，设计gRNA引物时,用T7启动子，为什么要求靶标序列满足GGN19GG的条件，，还有为什么中间一定要求是19个碱基，如果不是19个会怎样，，还有如果我的基因里面找不到满足这样条件的序列，那该怎么办呢，跪谢，赐教！谢谢！