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楼主

发表于 2013-3-14 10:17 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印

我用pLM慢病毒载体，转染293ft细胞生产病毒，然后用其感染细胞，但是没有荧光，然后提取细胞RNA，反转录，经行PCR，发现有外源基因的表达，请问为什么会没有荧光呢，是载体出了问题吗，请大家指教。

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沙发

发表于 2013-5-23 11:21 |显示全部帖子

回复 sizhengliu 的帖子- k5 R k4 f3 o/ w* | t, X1 ~

是在目的基因之后,用2A连在一起的,谢谢.

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藤椅

发表于 2013-5-23 11:26 |显示全部帖子

回复 daviddow 的帖子
. f/ |# D# X ]+ B8 Z
嗯,但是想用阳性的细胞做克隆,所以没有荧光的话没法保证阳性率,只能是盲做.所以很麻烦,是不是载体变异了呢?

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板凳

发表于 2013-5-23 12:38 |显示全部帖子

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0 N: K6 n+ r% v# x9 m6 ?
不好意思,我记错了,荧光序列是在目的系列之前,通过P2A相连.谢谢.

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报纸

发表于 2013-10-9 10:06 |显示全部帖子

回复 sizhengliu 的帖子

恩，估计是吧，再到网站上查的时候已经查不到质粒信息啦，被骗了呀

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地板

发表于 2013-10-9 10:06 |显示全部帖子

回复 prophe 的帖子
5 h1 O7 u0 f6 D# e! p
做了，不感染的确实没有外源基因的表达

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