脐带间充质干细胞形态求分析

huajie881026

养了几次脐带MSCs，细胞总是老化很快，前些日子也在版内发帖求助了一番，有大侠跟我说他一条脐带最多能传40代，这对我目前的状态来说简直是不可想象，所以想改进细胞培养方面的技术。在此麻烦大家伙指点一二！
: @) ?9 E: I/ _$ ?2 k# o想请问：我用的是DMEM-LG+10%FBS+1%双抗，一定需要加bFGF吗？
% @* V1 L9 U; s; p* D1 S" v' v胰酶现在的消化时间控制的还可以，昨天看到有文献说用0.05%胰酶消化1-2min的，我又一次怀疑自己的胰酶是不是加多了。我一般0.25%胰酶+EDTA在T25培养瓶里加500-800ul，之前PBS洗了之后培养瓶里留0.5ml左右，相当于等比稀释胰酶，这样消化约1min，然后终止消化。
7 r0 s! {: I0 @# y我想找出更多影响细胞状态的原因，求指点！
/ a, Z' j) d3 H$ u+ N- I下面是我养的图片5 [9 b, ^& m: A
P07 X) a3 j5 Q, ?7 a

5 _$ b/ _5 w6 J3 b. xP1
* F! @- u( d, c8 i. @& M. ]8 p9 G
P2
2 [% W3 ^# N- L! \

gghywtfz

我觉得最大可能是因为你使用的血清并非筛选过的血清。
+ L. o# V$ c! G. {1 ^另外，可以在培养基里加进去2mM L-glutamin
: E  q8 I2 A. C7 h一般MSC对L-glutamin比较敏感。( k& o" i) k; c' E. J

: W# n& L9 `7 u  W  p8 E2 b. U, X4 {9 e, _

willing

我养脂肪间质干细胞有同样的困扰。。。。求解答。。。

ind6562

如果你想让细胞活力更好，最好加加bFGF。
6 b7 Z9 T9 h, t9 r* X把种瓶密度调点，间充质细胞要保证细胞间的接触活力才会好。当然原代细胞不好调整密度，但你可以早点传代，不一定要等它们长到80%的汇合度，你这一等，细胞可能就老了。

ind6562

不好意思，是种瓶密度调高点

SKC-SFC

从你的细胞图片来看，并没有多老，属于正常情况

huajie881026

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3 B( Z9 u, Z, N# ^) q4 o# J* P+ ^5 `. L$ F
我一般是5000-10000cells/cm2，5天左右可以传一代。
( M1 q  c$ |: `bFGF是重组人bFGF吗？

huajie881026

回复 gghywtfz 的帖子
% y  O; q' b& e3 f- l' `& `' G* F- H* B
我用的是GlutaMAX，长效的1 c9 _8 q2 G5 T) B! q4 G
血清的话的确是没有筛选过的血清，请问哪个公司有适于这个细胞生长的血清呢？

流泪的鱼

你中和的方法考虑到了吗？这步是细节，也很重要。我以前曾经犯过小错误，导致传代后的细胞长势不好，好好注意实验的每一步骤。

ind6562

回复 huajie881026 的帖子; ]* R3 G+ w! o  r6 w2 K5 r( K$ _
4 r! B/ t  s$ K8 U: P
我们一般种的密度是500000CELL/T25培养瓶，这样算下来是20000cells/cm2，你的密度我认为是偏小了。
$ f/ k* Z, E3 E我没用过bFGF，有同学用的说是重组人bFGF，但你买之前应该自己先了解下。