求助！EB不贴壁！

ligangtiancai

如题，我在EB诱导过程中遇到几个问题：我用1*10*5/ML的密度将iPS细胞悬浮在低粘附的6孔板中，可形成的EB周边不够圆滑，感觉像是有很多的死细胞，而且悬浮5天后转移到铺明胶的板中后几乎没有贴壁的EB。查了一下大家说可能是iPS状态和EB质量的问题，可是我的iPS状态一直都不错，呈边缘透亮的卵圆形，可形成的EB边界总是感觉不够清晰，死细胞很多（悬浮和悬滴都试过，都是一样），不知是什么原因？谢谢！

细胞海洋

回复 xieyuhuan 的帖子% C( T7 w. R' x

, x; N/ ?7 f( W0 ~* Y/ H建议你发新帖提问

xieyuhuan

求帅哥传授下如何做EB球，具体的一些细节

也行天下

回复 ligangtiancai 的帖子
) V3 M' t" B3 B/ d
# x! _. L! S" m1 ~我们最近用AggreWell培养板做的EB，很漂亮，在后面的培养中，贴壁也很好。

ligangtiancai

回复 frankieisme 的帖子
9 ~& [8 S% E/ o9 g& P8 X
# E8 N1 v3 b/ R$ x9 W恩，我觉得你说的挺对。应该还是EB本身的质量不太好。不过我的iPS一直状态还有不错，难道问题出再EB的制作上，能告诉我一下你制作EB的详细过程么？

frankieisme

你可以把0.1%明胶包被时间延长到过夜or24h.还有EB接种好后最好前24h内不要动培养皿.我觉得最主要的原因可能是你EB的质量不太好的原因. 悬浮培养的时候最好每天换液,随着EB的生长,可以看到培养液变黄的程度越来越明显.

ligangtiancai

0.1%明胶包被30分钟

zmm

回复 ligangtiancai 的帖子
9 h, H) W. y2 J5 W" ^$ M5 c
" {6 l) Y2 W3 |' r6 X0 r那你铺明胶了吗?

ligangtiancai

回复 zmm 的帖子- F6 |. x2 L- L

5 b4 f# h1 ^& x我这个是诱导分化时的培养基。培养EB我用的是corning的低粘附板，主要是在悬浮5天后需要贴壁培养时EB不贴壁

zmm

回复 ligangtiancai 的帖子
% o/ ?* P* t  w% m& G
  q/ S1 P- X+ G/ i你这个培养基有问题吧？不加lif？培养基的成分还是挺重要的。你培养EB时可尝试用一下国产皿或者玻璃皿。