人胎盘间充质干细胞问题？

hhxxattxs123

请问组织块培养法长不出细胞来是什么原因，还有就是组织块容易飘起来？人胎盘最好是新鲜的对吗？有人培养这个细胞吗？有的话可以介绍下您的方法吗？谢谢

院士站

是不是加液太多

sailree

说一个简单点的方法，在100mm培养皿中加上2ml培养液然后将处理干净的组织放在这2ml的培养液里，然后用剪刀剪碎后，平铺开放培养箱24小时后补液至10ml，一般约5-6天半换。10天开始观察细胞，并全换以后3天换一次液。

回到从前

建议你还是选择胶质多的地方贴块，块尽量别太大，倒置2小时以上 应该可以 我们做过 就是细胞比较杂

hhxxattxs123

回复 单个核细胞 的帖子! R' A9 x# J4 `, ]5 z
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非常感谢啊，我最近在用你的建议来做，效果比以前强了呀，

xiaolong

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* ?' l2 Z3 e0 b; m# C$ `2 H; U# Q20分钟就加液时间太短了，1小时试试，可以参考一些华通胶贴壁培养的文献中贴壁的时间

单个核细胞

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贴壁法培养胎盘组织时，可取小叶，尽量清洗干净（去除红细胞），然后充分剪碎，可用吸管进行贴壁。贴壁3-4小时候（可以过夜），补加完全培养液，加液和转移的的时候务必小心，不要让培养液剧烈震荡，避免组织块漂起，培养箱静置培养，以后观察时也需小心操作。% E  m: _9 D' \; ~# l
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羊膜操作比较困难，太滑，不容易剪碎，其粘性不如华通胶，这就导致贴壁后很容易漂起，可慢慢摸索。

单个核细胞

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* M$ }' [' r2 S你可以先试试脐带华通胶组织块贴壁，熟练之后再行其它胎盘组织来源间充干的培养，贴壁时间适当长一点，然后再加入完全配液，这样有利于组织贴壁牢固。另外，也可将培养瓶倒置加液，待3-4h之后翻瓶，使培养液缓慢流遍组织块周围，然后放置培养箱静置培养。7 z' @9 w( @: i6 Z
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参考帖子：  J" _3 n# @" I8 c
脐带间充质干细胞的贴壁分离方法：
; G, b5 H- b2 I* yhttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
+ h5 \6 C0 P" X# S请教华通氏胶的剥离：! A/ P9 K9 k; l# R% I  G. ]1 @# {* F
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html, v4 A# u" F  u# R5 D
应用怎么样的培养技巧可以获得更完美脐带间充质干细胞：/ o7 z2 v( U5 J/ ]% W
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html( B* }$ K2 w: x: N/ ^
脐带间充质胶质的备置：! `1 V1 s( l; ?/ D, t
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html
# W7 a" y; x$ ]1 |* ^8 ^6 G脐带间充质细胞贴壁法出芽率怎么这么低：9 H! \/ }- a) F: F! O
http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html7 G3 T7 f+ R! Z0 R5 F* L7 }7 L
脐带间充质贴壁法到底几天换液：
& s; \) s  Y# T0 {$ y$ phttp://www.stemcell8.cn/forum-vi ... rby%3Ddateline.html* ~6 u5 S  P9 p4 q9 V- Z8 @
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参考文献：
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hhxxattxs123

谢谢哦，我的是用培养皿，用的是羊膜组织，就是剪碎了，也没有酶来消化就贴在皿上，等了20分钟就加培养液了5 H5 u! P' y* ?0 n8 p
时间长了，怕组织细胞死亡。

grape

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3 X% ?9 i& u9 ]! z回复 hhxxattxs123 的帖子( B9 j0 R- o* v% s2 W

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* |, z- b& }7 S2 W. t组织块容易漂起来一般是因为干烤时间不够。一般要烤1-4h不等。不知你目前烤了多长时间，再适当延长时间试试。0 U* o2 }: g& _5 V. @
还有，将培养瓶翻转平放的时候要慢，以免液体冲击组织块导致漂起。9 J" Z" O+ h! M+ G
人胎盘当然最好是新鲜的，离体时间越短越好，最好不超过3小时。
0 o5 [# z  H2 r/ I; B7 T我们一般用人脐带分离MSC。5 b* _9 I" D) d- b

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