错在哪一步，望赐教！-------谈脐血分离EPC

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具体步骤是：脐血稀释---红细胞裂解液裂解稀释后的脐血---取上清液-----再用密度梯度离心----吸取白膜层（白膜层不是很明显）---PBS洗两便---一部分养在DMEM中想得到MSC，另一部分养在EGM中为了得到EPC（用的是培养瓶，没有铺胶）------可三天后换液（换液时没有发现贴壁的细胞）------换液2天后发现瓶中仍没有贴壁的细胞。结果什么也没培养出来，步骤中哪一步错了，望赐教！

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呵呵，不好意思，我现在还在摸索中，我最近又做了一次，没有红细胞裂解液，直接把抽来的脐血稀释两倍（脐血：PBS为1:2），然后铺血进行密度梯度离心（Ficoll：脐血为1:2），  在20℃，400g，30min下离心，结果能看到模糊的白膜层，但夹杂着红细胞。吸除上清层（没有注意离白膜层多远），吸取白膜层后加大量的PBS洗涤。结果培养几天还是没有见到贴壁细胞。你能发给我一份你的试验详细步骤吗？我的邮箱542177563@qq.com，万分感谢！

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回复 zz091115 的帖子! m6 r% m: M; j1 P" B
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谢谢提醒，我原本打算做小鼠骨髓的，所以定的是小鼠的Ficoll液，做了之后发现小鼠骨髓中的EPC很难养，几乎没有任何成功，就转成做人的了，看来我要换一下Ficoll液了！还有EPC是不是一定要铺层？我一般用的是培养瓶，听说瓶底一般有铺层，有时最多用多聚赖氨酸铺一下罢了！这对培养出EPC细胞的影响大吗？

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8 r9 ~4 X+ C, K6 f4 q/ ]% p, @先谢了！

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' x! V0 h( E) X3 ?" N& l3 X看到你培养出的EPC克隆团图片很漂亮，请问是用成人外周血分离+fibronectin涂层培养出来的吗？培养几天得到的？