|
 
- 积分
- 307
- 威望
- 307
- 包包
- 8
|
这些日子，我把所有的实验都停下来了，把实验室孵箱里的细胞统统都扔掉了，重新从液氮罐里把细胞复苏，用支原体专杀药物PLASMOCIN处理。
. q4 i7 W' W; Z J其实是不得已，真地不得已。我们这个城市里几乎所有实验室的细胞里都有一种小颗粒物质，细胞传代时一旦密度传低，细胞就不容易长起来。我一直很得意自己的细胞状态很好，嘿嘿，培养基都是清澈的。但等到国庆节，我就无法乐观起来了，我用PLKO.1做RNA干扰，转染完毕后，我用puromycin筛选稳转株时，从1ug到8ug的筛选浓度都把细胞给杀死了，puromycin我在五月份专门测过筛选浓度，merck的产品，很强，4ug每毫升就能把未作转染的细胞全部杀死，但低于2ug就无效了。而此次转染后，细胞在1ug就死光了，细胞培养瓶里漂浮着许多黑色的团块物质，里面充斥着小颗粒。
8 V) z" G- l' B1 i, e我是很想凑乎下去，就这么个实验条件，我已经尽力而为了，老板急着要文章，我也急着要滚蛋。但如果就用这种细胞做下去，即便我不想造假，实际上就是在造假。支原体污染后，信号通路混乱，得出的结果就是似是而非的东东。% p# S. P( r A: \& j, T& [0 C0 |
临渊羡鱼，还是退而结网，这是个问题，斟酌再三后，我决定用plasmocin处理。当然细胞重新购买是上上策，但是中科院上海库还是协和库里的细胞，买来就是买一送一，没给你送真菌就是万幸喽！ATCC的细胞株国内引进是七千元一株，我需要8株细胞，老板要么自杀，要么杀了我，这是天堂鸟，我够不着。plasmocin很贵，50毫克打折下来是1500元人民币，能配两升完全培养基。连续处理2周，每隔两天换液，我用的是T75的瓶子，每次25毫升，成本算下来比抗体还贵，因为抗体至少可以回收重复使用。' ]5 b M) @( W. L4 i1 l
处理后，我的感觉是日日惊心。具体表现是：1.原本清澈的培养基里漂浮出一些黑色的团块，随污染程度不等而大小多少不等。2.细胞形态发生了惊人的变化，原本细长梭性的细胞变成了上皮样，原本结片聚团的细胞开始分散成单克隆样。我发现处理后细胞形态逐渐能与ATCC和文献上的图片一致了。很可惜，我们实验室没有显微照相设备，我只能用文字来描述了。3 i7 E* `; O6 c" J& a3 h( p* J
处理两周后，我有做了转染，puromycin在4ug每毫升的浓度下筛选出了稳转株，实验终于可以继续下去了！
0 K3 Q0 }0 v" E许多时候，我都在想有多少爱可以重来，国内库里的细胞大多都是支原体污染，大家都在做着似是而非的东西，老板们梦想着骑着自行车登月，良心与良知，泯灭在这些乌烟瘴气里。现而今我甚少佩服海归或老外，就我这条件，你TMD的做实验试试。 |
-
总评分: 威望 + 55
包包 + 110
查看全部评分
|
发表于 2011-11-10 01:24
