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[讨论] 关于某生物论坛一篇关于除去成纤维细胞培养基的讨论 [复制链接]

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发表于 2011-11-4 09:18 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
奉上原文:* d; ]' M8 s, T( B
取新生1-3天SD大鼠10-15只,无菌条件下剖腹取出胰腺置入无菌培养皿中,用眼科剪去除非胰腺组织, 4℃ Hanks液清洗三次后,用眼科剪反复剪切至<0.5mm3组织块,取浓度为1g/L的V型胶原酶溶液5-10ml与之混合,转入三角烧瓶中,于37℃恒温水浴振荡器消化30-40min, 加入两倍体积4℃Hanks液终止消化,用吸管反复吹吸后过80目 筛网,滤液以800rpm低速离心70s去上清液,并用4℃ Hank's液低速离心清洗2次,除去单个腺泡及上皮细胞。加入含2.5mg/L碘乙酸的PRMI1640完全培养基(含10%胎牛血清、10mmol/L HEPES缓冲液、1mmol/L丙酮酸钠、100000u/L青霉素G钾、100mg/L链霉素、71.5umol/L β-巯基乙醇)中制成细胞悬液,接种于75ml玻璃培养瓶中,于37℃,5%CO2,95%空气条件下培养5h后,用无血清培养基低速离心清洗3次,以除去成纤维细胞。然后用正常完全培养基培养24h,转瓶弃去贴壁细胞,用无血清培养液低速离心洗涤两次,沉淀物即为纯化胰岛。再用PRMI1640完全培养基养吧,可长成胰岛单层细胞。
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5 d! N6 R/ I+ o3 R讨论:(1)碘乙酸在培养基中起什么作用?: U" T1 A, a3 Q) c7 N
      (2)是否可以真的去除成纤维细胞?4 r/ A# D9 b8 \# t" g* k. q
      (3)有谁用过这种方法,可以获得胰岛细胞吗?
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