求详细的冷冻切片sample处理protocol

ivantanqi

最近本人要收tissue （tendon and muscle) sample，
# `1 |+ k1 R5 s0 E! j5 B. G+ ~/ n打算做一些冰冻切片和石蜡切片，后者比较熟悉，
: h+ ]! E: N( s5 l& e; s: ~前者没有做过，有谁有比较详细的protocol, 特别是关于怎么处理sample, 怎样固定啊，怎样冷冻啊，
+ i; a! [4 I  W. _" X8 i+ D能够最大限度的保护抗原啊
+ w5 n, ~7 B0 Z* U" a有经验的，帮帮忙哦，多谢啦。

ivantanqi

最关键的问题是大家在冰冻进OCT前，固定吗？

dulaiyouyu

冰冻切片：4%PFA灌流、后固定24小时，10%、20%、30%蔗糖梯度脱水，OCT包埋，切片。

gqs2872022

组织取材及时放液氮冻存就行了，剩下的交冰冻切片的技术员处理。

aminhair

到中国病理网吧，那里有专业的人。

addlepate

找到冷冻切片机，问用过的人，这个还真没必要做书面功课，
# [1 i' e- f. Y) s) G6 F: j1 ]前面的固定和脱水就按楼上某位的指导就行了，后面包埋基本是在切片时处理（注意载玻片一般也是需要包埋过的）。

shen_coco

回复 dulaiyouyu 的帖子( O# T" Y* q# e3 Q, n1 ?8 J

# ]- A. Y  x+ @' X, [9 F需要固定吗？直接包埋行不行啊

dulaiyouyu

回复 shen_coco 的帖子3 O* |* w4 d) d' V' F9 c: F

: B6 m/ m2 |8 Y; o0 q2 A8 l; J+ ]当然要固定。

shen_coco

dulaiyouyu 发表于 2011-7-23 13:50
- `6 D; P: w' Q+ d* ~回复 shen_coco 的帖子# Y6 U1 @# f* l3 B
4 P. P: N* \# A0 d. O3 C
当然要固定。

+ X/ c9 H- ]' F$ w; E. m
我听别人说，直接用TISSUE-TEK OCT 在-80度包埋就行，不知道这样做可以么，固定的作用主要是什么啊

runsong

是先切片后固定还是先固定后切片？