如何浓缩慢病毒？

sizhengliu

我要做慢病毒转染，现在想自己来浓缩慢病毒，看了一些资料，发现病毒浓度不高，浓缩是一个关键问题。我在的实验室有4度离心机，目前我还没有买任何试剂。请有经验的朋友路过指教，我怎样比较有效率的浓缩慢病毒？还需要什么东西呢？不胜感激！！

daviddow

超速离心，大约32000rpm，3个小时

sizhengliu

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+ h: e2 _- I7 N* g  z
谢谢！用你的方法，你能得到的滴度一般是多少呢？

huangcong1988

  病毒的收获及浓缩
: i4 D5 f5 b+ v: i7 K/ b" o（1)收集转染后48h（转染即可为0h计起）的293T细胞上清液。: i- _3 \8 E# \4 a
（2)于4℃，4000g离心10 min，除去细胞碎片。0 ]! ?, x0 Z8 O& o% T  h, P7 u
（3)以0.45μm滤器过滤上清液于40ml超速离心管中。4 m+ }+ g: ~& \2 `3 e) F& J* v
（4)把病毒粗提液样品加入到过滤杯中（最多19 ml），盖上盖子。将过滤杯插1 q& {  _+ x! f% C6 u$ M& |
到滤过液收集管中。# v1 S; l: j  p+ j
（5)组合好后，做好平衡，放在转头上。7 K" J7 h5 i$ t  g
（6)在4000g离心，至需要的病毒浓缩体积。通常需要的时间为10-15min。
1 V0 m1 j# v7 U/ Z（7)离心结束后，取出离心装置，将过滤杯和下面的滤过液收集杯分开。8 m7 X* q. j5 P8 N& V+ q5 W! O
（8)将过滤杯倒扣在样品收集杯上。* w6 ^+ P# V' L7 S8 p: }
（9)离心力不超过1000g,时间为2min。过高转速会导致样品损失。把离心杯从- i5 b1 q* F, e4 i( f* {
样品收集杯上移开。样品收集杯中的即为病毒浓缩液。
/ G- \  H- M) O2 Y（10)将病毒浓缩液移出，分装后保存在病毒管中，-70℃长期保存。取其中一支
: h$ ^5 x6 g+ P: H4 ~& G: c" i进行病毒生物学滴度测定。# M- |: p+ z2 r* N

shihuijunm

超滤管就可以，但滤膜是100k的，Millipore的有卖

daviddow

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4 {4 j! p0 Z+ L- y+ Z: m) O  J* Z. w8 @( [1 R2 P" g
过滤杯是在哪里买的？还有收集管？谢谢

huangcong1988

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$ w# S/ L1 |% }( s" f3 s. P
8 `( a' g4 i2 N在一般的试剂耗材公司应该都能买到

daviddow

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6 V- ^1 p3 l2 s, t. r2 C
! [- _, w( w. W4 @! C* P7 h' b国内的公司有吗？价格

huangcong1988

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+ R' }0 d* p" l; P( U2 r
这个不提清楚，呵呵，应该是不贵，耗材

wangyimei

如果有条件可以用BECMAN低温超高度离心机，26000rpm 2hours ,然后倒掉离心上清，可看到白色的病毒沉淀，再用PBS重悬