转基因动物原核注射的注射针如何制作啊？

zpzp0312

原核注射时，DNA注射针怎么制作0 M" ]1 _9 K: E8 g
是不是和ICSI或者ES细胞注射的注射针制作方法有区别
6 E! P8 e% H% d- q0 o0 \因为它的尖端开口内径要小很多
. k9 y/ I1 F' ~3 I, T/ x我外行，一点也不清楚
5 X4 p! c. ?+ X$ V+ Z! h8 g我就会做ICSI和ES细胞注射的注射针( {1 h& w5 L0 ]3 [9 q
DNA注射针太细，断针时必定会被加热球融化，造成堵塞吧？

yangpan521

不是有拉仪吗?可以设置数据，想要什么样的规格都能拉的出来，建议一些相关资料，这样可以改进，

zpzp0312

回复 yangpan521 的帖子% {$ z$ R* O5 j

6 E9 @2 k/ ^/ P3 x4 T( B: x4 Q我的意思是断针，因为针尖内径太小; w6 z  B! }; k) f& m
断针时容易被玻璃珠融化，堵塞

hualin840518

把断针仪的温度调低一点
! }4 Z7 C+ J  o$ `0 [& J* r1 w而且在加热铂丝之前最好不要把针接触到玻璃珠
  D# V9 ]) g9 f# e5 F7 B) T: ?等温度升起来之后
: {4 j; H% |; p* v在放大的视野中慢慢的把针靠近玻璃珠（在加热之前要调试好加热时移动的针能正好接触到玻璃珠)
" D9 w1 T8 p6 l8 F然后迅速断开加热的电源
9 c8 j; r/ f) r1 G这样应该就可以了
3 Z8 s& U  Q# X  Q- p  @) `9 R不过还与做针的熟练程度有关" H& Z: S# y' E$ z# M$ H. z
我是这样做的
0 ^  i" A6 v. B( c效果很好！

ambassador

1.玻璃球温度调到30°左右，- ~; Q& [: q9 o+ }# P7 T5 }! G
2.将玻璃针调到与玻璃球同一界面（调至符合口径），
& L: Y3 _6 U3 I1 f/ g& A3.先踩住，使玻璃球升温，
9 B9 H7 j- L: D# i: f% h/ a4.然后调节旋钮，将针向玻璃球靠近，贴住，
+ [& @. `' ?8 g) t5.待玻璃针有弯曲迹象的时候（大约5-8s），瞬间移离玻璃针，此时将煅开玻璃针。+ D2 s0 I( ?# T2 t2 F+ f! `3 l8 }

4 i! M. i5 v% L( i. N# I9 N& A如果上面的protocol还不行，只能怀疑是不是动手操作能力的问题了！

xiaomingxu

楼上两位说的只适合核移植或嵌合体用针，转基因原核注射用针不需要用煅针仪来断的，因为针尖部很细（<1um），不适合用煅针仪来断。 但是拉针仪参数一定要设置好，不同的拉针仪使用参数也不一样，需要摸索。参数设置好后拉出来的针直接可用于原核注射，如果有点堵塞或不通可以在holding上轻微碰碰，使口径稍微增大。

cony

楼上说得没错，最近我们在做原核注射，调查好参数拉出所需针尖喇口径后，再烧角度，烧完就可以了，不用断针。在使用时，将针类在持卵针上蹭一下，蹭出一小 口就行。

POPOLD

不需断针  撞针，就是装好针后 ，注射针撞持卵针

zpzp0312

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9 c2 [  y, S6 |( o) q& T' G
+ O1 g- }/ Q; h" X+ z8 a6 N& X+ m谢谢
& U+ n; }# i+ y) ~( `* R看来还是有明白人+ e$ q. r5 `: Z
前面几位说的都是细胞注射针，呵呵

zpzp0312

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+ {8 E1 {2 {7 K! @+ K3 l  Q谢谢