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aulenuyah 2015-7-6 16:57
yangpan521: 你好,请问你是不是做过转基因细胞?
是的,做过一段时间
hyde 2015-6-18 15:33
yangpan521: 你好,请问电转后的细胞,晒出来的克隆,最多可以养多少代
要看起始时细胞代数,一般加起来10代左右都可以的,传代的时候不要太稀(不知道你们用来做什么?做克隆动物在6,7代比较好),可以加bfgf+15%血清,这样细胞老化慢,可以多养两代。
genedu 2015-5-5 12:36
yangpan521: 你好,请问你做过成纤维细胞电转吗?我现在在要做转基因细胞,用样的成纤维,电转后,却不认识克隆细胞,所以,你是否有相关图片可以参考呢
我没有做过羊的成纤维细胞筛选,但是道理都是一样的。首先你电转完毕之后,电转的细胞要按照梯度稀释法进行铺板子(10cm),1:10,1:100,1:1000,在大概一周之后就会发现有单个的克隆出现,当然必须是克隆之间独立存在的,不要连成片。
hyde 2015-5-4 11:39
yangpan521: 你好,成纤维细胞电转后,长出的单克隆是圆形的吗?有图片可以参考一下吗
我找了一下当时的照片,主要是电转第二天药杀组的荧光照(在6#),没有克隆后的图片。我们的显微镜在细胞房外面,10ml dish 不太好拿出去,所以没有拍过。形态很明显。祝成功
hyde 2015-5-4 10:40
yangpan521 : 你好,成纤维细胞电转后,长出的单克隆是圆形的吗?有图片可以参考一下吗 图片不太找的到了,你不电转就直接铺成纤维细胞(计数一下确保细胞不长在一起),长出来的形态就是了(我们用10ml的dish铺,这样克隆不会连在一起),不用纠结形态,一般铺下去第二周就可以看到了。有些细胞状态好,会形成致密(一般成纤维细胞长满后的密集条纹状)的成纤维细胞细胞簇,一般是圆形的,这样的克隆以后比较容易扩增。有些克隆状态不太好,会显得稀稀疏疏,也基本上是圆形的吧,但是后面挑出来后不太好养。 ...
yingjie 2013-9-26 08:54
yangpan521: 你好,你求到美国血库AABB的认证手册了吗,还有你对fact认证手册有了解吗
中文版的手册没有,在这儿下载了几个英文版的关于:细胞治疗产品服务标准,还有AABB官网找到基本书,我是没怎么研究了,是我领导要,fact认证手册,不清楚是什么认证,我查查看
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yangwy028 2011-12-2 11:31
yangpan521: 想问你一下 ,小鼠人工输精时大约数多体积,我现在输精10ul升 可行 ,指导一下
计数就是10ul就可以了啊。如果还觉得不够精确的话,可以把计数板的四个大格都数了,取平均值。
yangwy028 2011-11-18 20:36
yangpan521: 想问问你所用的小鼠输精器是什么样的?还有在输精时是将小鼠四肢朝上进行的吗?
一般情况下小鼠正常的话都能够自己形成阴道栓的。人工的话就用6号注射针头,截去尖端斜口部分并打磨光滑,连接0.25毫升注射器做输精器,直接经阴道、子宫颈注入子宫结合部,小鼠的摆放方向可以由自己的习惯来选择。无需堵塞阴道
inno 2011-10-21 16:27
yangpan521: 已经做过了 细胞是羊的皮肤成纤维细胞,逆转录病毒体系
我目前在做猪的IPS,是猪耳成纤维,也是逆转录病毒体系,现在就是筛选不出来,感染效率什么的都还可以。不知道是培养体系还是铺板密度有问题?
inno 2011-10-21 13:34
你是做羊IPS的吗,请问一下用的是什么来源的细胞诱导的,用的什么体系?
yangpan521 2011-8-24 09:28
很简单,拿到组织后 ,就把他当做普通的组织块来培养就行了(这是老板这样吩咐的),但我个人认为畸胎和正常胎儿培养后肯定会有差别,就想后期如果诱导成IPS后,会不会有更大的差别还无差别,这都不好说,自己也正在思考中
dongxin 2011-8-24 09:21
yangpan521: 没有做人ES呀,只是正在做人的皮肤成纤维细胞,后期要诱导IPS细胞
您好,我在论坛上看到您是采用组织块培养法,药流畸形胎儿8月龄,做原代培养,因此想向您咨询一下对于药流畸形胎儿您是如何处理提取细胞的!具体一点的^^不知可否
dongxin 2011-8-23 09:10
您好,在讨论区看到您是做人ES的原代培养,想向您请教具体的操作步骤,不知可否!谢谢^^
mckf111 2011-4-25 19:33
你好 小弟这里急需293T细胞包被慢载系统 在网上听说贵处有 不知您身在何处 谢谢
yangpan521 2011-4-21 19:50
不好意思,我这没有
yuangaoqian 2011-4-21 12:02
你好!请问你那有FUW-M2rtTA载体吗?是否可以赠送?我们会在将来发表的文章里对您的慷慨馈赠表示感谢!现在实验很紧张,不想再通过Addgene公司要了,所以想看看国内有没有可以赠送。非常感谢!
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