关于克隆效率问题

songzxj

各位研究员：7 F) N0 b! B; v. a! a7 _0 R
    本人最近一直在思考一个问题，那就是克隆的效率还能提多高？最终能不能达到体外受精的效率呢？请各位研究员发表您的见解。

songzxj

先抛砖引玉。! A+ U# q6 Y, x+ K7 D$ Y
我觉得克隆的效率可能不会像IPS诱导那样，随着其研究的推进而不断得到提高。
5 j7 J8 i6 e" U) g" e2 m因为IPS在诱导过程中可以有针对性的、特异的改变培养条件或者更换供体细胞等手段来提高效率。而克隆是卵胞质随机的reprogram体细胞，重编程的是否全面，是否每一次都一致，很难讲。卵子reprogram过程的相关因子研究并不如IPS那样清楚。没有办法做到像IPS那样有针对性的添加相关的因子。自从1997年多利诞生到现在，世界各国克隆专家一致在致力于克隆效率改进，但是效果甚微，因此我觉得克隆的效率不会得到显著的提高。+ s7 A" }. y* I4 P* R
一点拙见，请大家指正。

张也行

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7 A) L( F4 ~* h5 h2 v" a1 E# H8 }5 C7 j% v* |1 N
首先核移植的效率比正常用四个因子诱导的效率要高一些！并且核移植重编程得到的ES细胞要比iPS细胞更接近ES细胞。! D3 v# Q3 r5 Z( Q9 z3 o% S
iPS重编程和核移植都可以看成是随机的。iPS重编程因子发现也是源于卵子具有重编程能力，并从中发现了四个因子。
8 b3 Q2 T2 E$ R* H7 c. ?; \确实iPS更好容易manipulation，但是四个因子重编程得到的iPS常常面临着不完全重编程的问题，影响iPS的分化潜能。再说核移植得到的囊胚也不是不能认为干涉的啊，在iPS中有效的一些小分子有一些，比如影响染色体结构的小分子也能促进核移植的效率的。
& }# v9 e7 ?7 s- |( o8 b$ b( j% O; J) @9 S/ a2 a; Q- a* ~

douhw

因为是HMC，体系都还不错，囊胚率也高，第四周受体怀孕检测有时达100%，而且转基因有时更好，但问题是怀孕中期有吸收的，也有中后期死亡的，畸形的，还有预产期孕体给受体信号不足而产道不开滞产死亡的，产后哺乳期也有死亡。总之，要解决整个体系问题，如楼上所说，或许可在囊胚阶段加以干涉。

songzxj

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3 s& N" t" I, L
谢谢！
5 {' t. m& S$ O6 ^8 n非常赞同你的一些观点，核移植效率要比IPS的效率要高，且NTES比IPS更接近ES细胞（这是去年一nature paper求证过的）。
' N) a7 ~8 v7 `! h( A9 K4 R' E
我们知道四因子发现源于卵子的重编程（或者细胞融合过程的重编程，我不确定），但是这些发现却没有应用于克隆效率的改进！你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。# v( q4 ^1 J" F4 R( F1 M* \4 h, `

$ E0 z5 \' P2 \+ T2 `所以我想IPS中有效的因子对于提高效率可能并不起作用。

songzxj

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5 T; U. y0 s4 I, F$ b' Q$ X- D. G2 i0 ^  u  E
不好意思，我其实是不看好HMC的，可能是偏见吧。不过它在牛的应用上真的很成功。+ Q3 E5 l& V% d: b3 }; }' a

  M6 ]: h9 ?2 ?2 P/ d1 e3 v请问你做的是什么动物？第四周检测怀孕率，猪吗？
  K+ p( E% y. ?9 D. N* G& @' Z2 p. L5 g  f# D+ n
怀孕中期吸收的现象是很多克隆动物共有的问题了，这个追根溯源应该还是重编程不完全造成的，所以说体外囊胚率高并不一定胚胎质量好，它只是其中一个参数。
8 C! R0 @2 t7 C) o) [& U/ a6 L- H& k; L' |" u
解决重编程问题的途径不外乎那么几个时间点：供体细胞、早期胚胎和囊胚期。但是前两个时期算是预防的话，那囊胚期只能算是补救治疗了，因为那个时候胚胎已经由多潜能细胞期重新进入分化过程。

张也行

回复 songzxj 的帖子0 \9 l& X% @, I% i7 \& V% q

/ i: Y- ]; r8 i; C' t' i9 t
2 I4 x) d. A7 M9 W- a

你觉得是这些发现还不足以提高克隆效率还是yamanaka等人专注于IPS的诱导而忽视了克隆？我觉得可能的原因还是前者。

' _0 r9 L3 r- V& z6 x
我觉得也不是。在成熟的MII期的卵子中是有这些因子。虽然Yamanaka曾在文献中说iPS灵感来自核移植，但是iPS最初是从ES特异性的基因库中筛选出来的，分离出来的是因子都是与多能性相关的关键因子。但是，我觉得我们不应该吧核移植得到的一个完整的胚胎，也就是说核移植获得的是全能型的细胞（totipotent），从发育的囊胚中分离出了ES细胞。而四个因子诱导的iPS细胞是多能性的（pluripotent）。核移植获得的融合胚胎能生长到囊胚阶段，从中分离出来的ES细胞（NT-ES）与正常fertilize，分离出来的ES更接近也就容易接受了。& t( a! K" h' U
所以，iPS应该更多的向核移植“学习”，比如周琪和高绍荣都试过分析成熟卵子中的蛋白质以期望获得更多，更关键的重编程因子。

douhw

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( S7 O" j* w4 V' H: Q( L
3 Z2 Z6 v7 D% E* ^HMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。& c+ W+ u/ p# ~; a: B
0 t# ^( O8 h% d/ H# D
我觉着，重编程最重要的处理阶段是在融合前后，因为在体细胞进入卵胞质、融合后，重编程便开始了。

ambassador

+ V8 H; J% T6 W2 j" T3 r' p; I% y

douhw 发表于 2011-1-11 09:55 ! a  E" x, `" T
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2 Q6 }8 V# f, G- C
  S  c: {: ], c8 HHMC也有自身的长处与不足，但总体来说，效率换好。我所做的动物是猪。

' t7 s8 t1 h( I% P9 `9 L1 N4 t
+ }- c0 F- [, c5 h我个人觉得不足之处是需要提供大量的卵母细胞（这个在大型猪场可以提供，也就不是问题了），其他的不足之处，还请多指教？
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还有在重编程最重要的处理阶段，融合前是只对受体细胞（去核的卵母细胞）进行处理？融合后的体外成熟除了常规的方法外是如何处理？

douhw

回复 ambassador 的帖子  p4 q# r; @: {( Q# A
1 X! K& W5 J5 T) U, q
其实我认为，透明带的缺失、以及如在制作嵌合体方面等都存在与显微注射相比较的不足。
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而且关于重合编程，我认为融合前对卵母细胞的处理即去核阶段，融合后对重构胚的处理是最重要的处理阶段，以为此时供体细胞与卵胞质融合而编程开启。但是，尚未付诸实施。