同种异基因造血干细胞移植受者血清白介素18水平与急性移植物抗宿主病的关系 - 国内文献区干细胞之家



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发表于 2009-3-3 12:37 |只看该作者 |正序浏览 |打印

作者：柳金，  张献共，  陆道培作者单位：北京大学人民医院血液病研究所，北京  100044；  1北京大学深圳医院血液科，深圳  518036

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      【摘要】  　　本研究探讨同种异基因造血干细胞移植(alloHSCT)受者血清白介素18(IL18)与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系，查明血清IL18在aGVHD发病中的作用，为临床早期预测aGVHD提供可靠指标。采用双夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测62例alloHSCT患者移植前及移植后aGVHD发生前后血清IL18表达水平。62例患者被分为5组：A组为无aGVHD移植前组（28例），指移植后没有发生aGVHD的患者在移植前收集的标本;B组为有aGVHD移植前组（34例）, 指移植后发生aGVHD的患者在移植前收集的标本;C组为aGVHD症状前组（34例）, 指临床出现I-II级aGVHD症状前3-4天的标本；然后根据I-II级aGVHD患者治疗后，有无进展至III-IV级回顾性地将aGVHD前组患者分为疗效好组（18例）和疗效差组（16例）;D组为I-II级 aGVHD组；E组为III-IV级aGVHD组（16例）。结果表明：  34例患者发生I-II级aGVHD，其中16例aGVHD进展至III-IV级；发生aGVHD患者的血清IL18表达水平显著高于未发生aGVHD患者, 血清IL18表达水平上升发生在aGVHD临床症状出现前3天左右；血清IL18表达水平与aGVHD的严重程度呈正相关,与HLA配型、预处理方案及感染无关；aGVHD早期血清IL18表达水平与预后相关；血清IL18高表达者aGVHD容易进展至IIIIV级。结论：血清IL18 与aGVHD的发病相关联,检测血清IL18 水平有助于aGVHD早期诊断，血清IL18表达水平可作为评估aGVHD病情、判断预后的指标。 , Y( S* {* P; U3 c8 x4 u. X
      【关键词】同种异基因造血干细胞移植白介素18  急性移植物抗宿主病早期预测
   　　Correlation betweenSerum Levels of IL18 and Acute Graft Versus Host Disease inPatients after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation5 N3 k: H. R* T' ?2 {# n
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LIU Jin*, ZHANG XianGong1, LU DaoPei
, c/ i+ [4 d0 ~+ m
Institute of Hematology, People Hospital, PekingUniversity, Beijing 100044, China;1Department of Hematology, Shenzhen Hospital, Peking University, Shenzhen 518036, China
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AbstractThis study was aimed to investigatethe correlation between the serum levels of IL18 and acute graft versus host disease (aGVHD) inpatientsreceived allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (alloHSCT)，andto explore therole of serum IL18 levels in the pathogenesis of aGVHD so asto provide a reliable and early indicator for the diagnosis of aGVHD.62 patientsreceived alloHSCT were enrolled in this study. Before and after transplantation, as well as at onset of aGVHD. the serum levels of IL18 were analyzed by ELISA.62 patients were divided into 5 groups:group A without aGVHD(28 cases) referred to the patients who had no aGVHDafter transplantation and whose specimen were collected before transplantation; group B with aGVHD before transplantation (34 cases) referred to the patients who had aGVHDafter transplantation and whose specimen were collected before transplantation; group C before the onset of aGVHD (34 cases) referred topatientswith I-II grade a GVHDwhosespecimen were collected before 3-4 days, and according to whetherthe I-II grade aGVHD patients developed III-IV grade or not after treatment, these patientswere divided into two subgroupsretrospectively, onesubgroup had good curative effect ( 18 cases) and the other subgrouphad not (16 cases); groupD with I-II grade aGVHD; group E with III-IV grade aGVHD (16 cases).The results showed that34 patients developed I-II grade aGVHD, then out of them 16 patients (16/34) developed III-IVgrade aGVHD. The serum levels of IL18 in these patients withaGVHD were higher than that inpatients withoutaGVHD.About 3 days before onset of aGVHD, the serum levels of IL18 started to increase. The serum levels of IL18 were correlated with the severity of aGVHD, but no correlation was found with infection, conditioning regimens and disparity of HLAtyping. The serum levels of IL18 in the early stage of aGVHD were correlated with prognosis. The aGVHD of patients with higher serum levels of IL18 easy developed toIIIIV grade aGVHD. It is concluded that the serum level of IL18 in the patients received alloHSCT is related to the occurrenceof aGVHD. Detections of serum IL18 are helpful for the early diagnosis of aGVHD, and the serum levels of IL18 may be considered as a reliable indicator to evaluate the prognosis and severity of aGVHD.6 o' ^- ~+ y. y/ D4 h: A; K
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Key wordsallogeneic hematopoietic stem cell transplantation; IL18; acute graftversushost disease;early prediction
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J Exp Hematol 2007; 15(3):553-557
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中国实验血液学杂志J Exp Hematol 2007; 15(3)同种异基因造血干细胞移植受者血清白介素18水平和急性移植物抗宿主病的关系急性移植物抗宿主病（aGVHD）是同种异基因造血干细胞移植（alloHSCT）的主要并发症之一。已有的研究表明，aGVHD 发生与细胞因子密切相关［1-4］。目前临床上主要根据皮肤、肝脏、胃肠道受累症状的出现和程度对aGVHD进行诊断和分级，缺乏直接的免疫学证据，因此需要寻找一种能够直观、实时反映aGVHD的免疫学指标。本研究采用双夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测62例alloHSCT患者(其中HLA配型不合/单倍型相合的34例)移植前及移植后aGVHD发生时血清IL18表达水平，以探讨血清IL18在aGVHD发病中的作用，为临床早期诊断aGVHD提供可靠指标。至今为止，有关alloHSCT后血清IL18水平报道，均为HLA全相合单纯alloBMT或alloPBSCT受者血清IL18水平检测结果，我们第一次报道HLA配型不合/单倍型相合alloBMT加alloPBSCT受者血清IL18水平与aGVHD的关系。
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材料和方法+ L/ b/ ]  M) m) V

病例
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62例alloHSCT患者为2004年1月至2004年11月期间北京大学人民医院血液病研究所骨髓移植病房住院病人, 男43例，女19例，中位年龄30(9-49)岁。62例中诊断为急性淋巴细胞白血病(ALL)13例, 急性髓系白血病(AML)15例, 慢性髓系白血病(CML)27例,骨髓增生异常综合征(MDS)3例,非霍杰金淋巴瘤（NHL）2例，再生障碍性贫血（AA）1例，多发性骨髓瘤（MM）1例。HLA配型全相合28例，HLA配型不合34例，1个位点不合4例,2个位点不合18例,3个位点不合12例。所有患者均签署知情同意书。本研究选择34例I-II级aGVHD患者（HLA配型不合和全相合分别为20和14例），其中16例为I-II级进展至III-IV级aGVHD患者（HLA配型不合和全相合分别9例和7例），同时选择28例无aGVHD患者作为对比（其中HLA配型不合和全相合各14例）。aGVHD的诊断及分级参照参考文献［5］。62例患者分为5组： A组为无aGVHD移植前组（28例），指移植后没有发生aGVHD的患者在移植前收集的标本; B组为aGVHD移植前组（34例）, 指移植后发生aGVHD的患者在移植前收集的标本; C组为aGVHD症状前组（34例）, 指临床出现I-II级aGVHD症状前3-4天的标本, 根据I-II级aGVHD患者治疗后，有无进展至III-IV级回顾性将aGVHD前组患者分为疗效好组（18例）和疗效差组（16例）; D组为I-II级 aGVHD组； E组III-IV级aGVHD组（16例）。28例无aGVHD组与34例有aGVHD组中位年龄无显著差异(P>0.05)。另设感染组（24例），是指没有合并aGVHD时单纯感染患者的标本。
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血清标本采集3 w% h* ~, V( f

分别于移植预处理前、预处理后输注干细胞前，移植后住院期间每周1、4采集外周静脉血标本5ml，血液标本经离心后取血清于-80度冻存备用。& S) ^* J- m/ @( S" q  b
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血清IL18检测
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患者血清IL18水平采用人IL18试剂盒（由深圳市炬英生物科技有限公司提供）用ELISA法检测。主要步骤如下：在微孔板留一空白对照孔,其他孔加血清标本或不同浓度标准品100 μl,加入50 μl生物素标记的抗体；室温孵育3小时后洗涤3次，加入100μl酶结合物；室温孵育30分钟后洗涤3次，加入100μl底物；室温避光，显色12至15分钟，加100μl硫酸，终止反应，450nm处读取OD值。试剂盒的最小检测浓度为45pg/ml。$ s4 u; N* r: h. s& [9 I
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HLA配型、预处理方案、供者造血干细胞动员及采集、GVHD预防、植活检测' t" K* p9 i8 G% K) e. s
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HLA配型A、B位点检测方法为低分辨方法，DR位点采用高分辨方法。

预处理方案阿糖胞苷4 g/m2，HLA配型全相合者用1天（移植前10天），HLA配型不合者用2天（移植前10，移植前9天）；Bu(马利兰） 2 mg/(kg·d)3天；环磷酰胺1.8 g/(m2·d)2天；甲基环己亚硝脲（MeCCNu）250 mg/m21天。2 T! Z1 F2 Q# [5 k. C, _) c2 D

供者造血干细胞动员及采集供者接受rhGCSF(日本中外制药株式会社产品）5 μg/(kg·d)，连续皮下注射5-6天，第4天采集骨髓有核细胞；第5至6天采集PBSC，总单个有核细胞数（3-4）108/kg。
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GVHD预防在经典的环孢菌素A加短程甲氨喋呤方案基础上，加用霉酚酸酯，HLA配型不合者加用抗人胸腺细胞球蛋白预防GVHD。
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植活检测造血重建均经性染色体、PCRSTR指纹图或HLA不合位点位点配型中2项以上证实为完全嵌合体。$ |7 r5 g7 ?! b/ k

以上内容详见文献报道［5］。
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结果6 H" J+ g1 G: T; c+ ?& D& Q

造血重建6 }: G* P9 q$ X! f* g& l
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28例无aGVHD组与34例aGVHD组输注有核细胞数分别为（8.12±3.31）108/kg、（7.60±3.0）108/kg，两者无显著差异(P>0.05)。所有患者均获得造血重建，移植后中性粒细胞>0.5109/L的中位时间在合并aGVHD组为14(10-20)天,而在无aGVHD组为15(11-25)天,两者无显著性差别(P>0.05)。1 }) Z; S# [5 H! ?

血清IL18与aGVHD发病关系

34例合并aGVHD组与28例无aGVHD组之间移植前血清IL18水平分别为72.01±27.18、68.89±27.95 pg/ml,两组无显著差异(P>0.05)；移植后合并aGVHD患者，发生III-IV级aGVHD组血清IL18水平高于I -II级GVHD组(P
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aGVHD患者血清IL18表达水平动态变化/ X" O+ n% W4 b! x- V. G- z

18例I-II级aGHVD患者患病时与治疗缓解后血清IL18水平分别为396.26±56.44和230.72±46.15 pg/ml,前后比较差异显著(P

血清IL18与aGVHD预后关系

根据有无进展至III-IV级aGVHD,回顾性地将34例aGVHD症状前组患者分为疗效好组（n=18）和疗效差组（n=16），两组血清IL18值分别为317.88±47.29和499.46±102.18 pg/ml, 疗效差组血清IL18水平显著高于疗效好组(P" Y5 I. |0 A5 f0 E7 I. d

血清IL18与感染关系5 y$ j! m( {1 s' {2 b& O& R

检测了24例患者移植前与感染发生时血清IL18的水平,分别为69.33±26.57和82.86±31.51 pg/ml,前后比较差异无显著性(P>0.05)。  K1 ~; {( A; u$ F

血清IL18与预处理方案关系

检测34例单倍型相合患者预处理前与预处理后血清IL18表达水平，两组分别为67.27±27.72和80.7±29.54pg/ml，无显著差异(P>0.05)。% \, d: G' v: S' ^/ R& k) Q
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血清IL18与HLA配型关系1 N  C3 n8 x. Q& R

HLA配型全合组与不合组患者在移植前、移植后aGVHD时血清IL18水平比较显示，全相合组与不相合组无显著差异(P>0.05),但无论是HLA配型全相合组与不相合组患者, aGVHD症状前组、I-II级aGVHD组、III-IV级aGVHD组血清IL18水平，与移植前比较均显著升高(P
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讨论/ n- I0 C" \0 F# K$ `7 |' y( P

aGVHD的发病机制为造血干细胞移植供者的T淋巴细胞被受者组织抗原激活，这些细胞的增殖、活化与多种细胞因子（CK）及表面分化抗原(CD分子)有关。GVHD发病机制研究发现，CD4 细胞中辅助性T淋巴细胞1(Th1)亚群与GVHD相关，Th1细胞主要分泌IL2,INFγ等(I型炎症因子)，IL2和IFNγ在aGVHD发病中起关键作用,控制和放大对异体抗原的免疫应答,并刺激单核细胞分泌多种炎性细胞因子,最终导致aGVHD靶组织的损伤,而细胞因子IL4和IL10在aGVHD的发病过程中起抑制作用［6,7］。Fas/FasL系统是介导凋亡的主要途径，表达于包括GVHD靶器官在内的多种器官，鼠实验表明，Fas缺陷者移植后GVHD发生及致死率较高，并伴有血清IFNγ与TNFa水平升高，提示Fas/FasL也参与了GVHD的发病机制［8］。IL18是1995年发现的一种细胞因子, 是18.3 kD的蛋白质。IL18具有如下免疫调节活性：①促进T细胞增殖,增强Th1单克隆和富集的多克隆T细胞产生Th1类细胞因子，增强Th1细胞毒效应 ,同时可以抑制IL4和IL10的产生［9］；②增加NK细胞的细胞毒作用：在体外实验中, IL 18 可以增强外周血和脾脏天然杀伤细胞的活性,明显增强NK细胞的细胞毒作用,且呈剂量依赖性；③直接增强FasL 介导的Th1 细胞毒效应［10］。因此,我们设想IL18在造血干细胞移植后的aGVHD发病中起着重要的作用。
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国内外有关alloHSCT后血清IL18水平报道较少，所见的均为HLA全相合单纯alloBMT或alloPBSCT受者IL18水平检测结果,未见HLA配型不相合/单倍相合alloBMT加alloPBSCT受者血清IL18水平报道。 Fujimori 等［1］用ELISA法检测37 例恶性血液病alloBMT前后血清IL18 水平，aGVHD病人血清IL18 的浓度明显增高并且与其严重程度相一致,在aGVHD得到适当的治疗后，血清 IL18 的水平降至正常，血清IL18 水平不受移植前化疗方案、移植物或细菌感染的影响，提示IL18 在aGVHD 的病理过程中可能起重要的作用，血清IL18 的水平对预测aGVHD是有价值的。Nakamura等［2］检测18例alloBMT后血清IL18浓度,国内徐敏等［3］和居小萍等［4］分别检测10例和15例alloPBSCT后GVHD患者IL18 水平,结果与上述报道一致。

我们检测并比较28例HLA相合、34例HLA配型不相合/单倍相合HSCT受者血清IL18 水平，结果发现IL18 水平与HLA配型无关，无论HLA相合、还是HLA配型不合/单倍型相合造血干细胞移植受者中发生aGVHD患者的IL18表达水平均显著高于未发生aGVHD患者, IL18表达水平与aGVHD的严重程度呈正相关, 与文献报道一致,提示血清IL18水平与aGVHD的发病相关联,检测血清IL18 水平有助于aGVHD早期诊断。本组结果显示，在aGVHD早期时, 疗效差，进展至IIIIV级aGVHD组血清IL18 水平显著高于疗效好组，这提示血清IL18水平在一定程度上可作为判断aGVHD的预后指标。目前对aGVHD的防治较为困难，常用的药物如环孢菌素等对某些进展或重度aGVHD患者疗效可能不佳，早期诊治可以及时控制aGVHD发展，改善预后。但目前临床上主要根据症状的出现和程度对aGVHD进行诊断，缺乏直接的免疫学证据，早期症状往往不典型，且容易与感染混淆，以至延误治疗。本研究证实，血清IL18表达水平与感染的发生无关，而发生aGVHD患者的血清IL18表达水平显著升高，血清IL18表达水平在aGVHD 临床症状出现前3天左右已经明显上升，提示检测血清IL18 水平对aGVHD有较高的特异性，有利于早期预测aGVHD。" N- r: z, v0 D: Y, `4 ^: T
      【参考文献】  N0 C( C, ?' j$ U+ K% A+ d1 U5 a
　　1Fujimori Y, Takatsuka H, Takemoto Y, et al. Elevated interleukin18 levels during acute graftversushost disease after allogeneic bone marrow transplantation. Br J Haematol, 2000; 109:652-657. o) e+ \( J8 `" X1 O  v
9 D% g' E6 o8 f0 H9 s

; ]0 X; i5 e8 e" a
2Nakamura H, Komatsu K, Ayaki M, et al. Serum levels of soluble IL2 receptor, IL12, IL18,  and IFNgamma in patients with acute graftversushost disease after allogeneic bone marrow transplantation. J Allergy Clin Immunol,  2000; 106(pt2):S45-S508 D5 e) N' p6 c& Q
( Q+ g6 L3 U: _6 N+ G
3 z& S: d* H' A" E% `
( A' n2 a' u8 i% A- a
3徐敏, 刘国强,邢健等. 细胞因子与急性移植物抗宿主病的关系. 中华内科杂志，2005; 44:170-135

4居小萍,王健民,侯军等. 白细胞介素18在急性移植物抗宿主病. 中国实验血液学杂志,2002;10:452-454* P. K2 p( |: X4 W
9 k6 R, c6 g' Z9 G/ h- Z; E/ M
* _8 L4 x1 z" d5 U1 B9 l
$ Y5 e: j: e* V) R
5韩伟,陆道培,黄晓军等. HLA配型不合造血干细胞移植GIAC方案100例临床分析.中华血液学杂志,2004;25：453-4577 |& n6 o3 D! @0 b% ^* T: \
5 G1 w' r) B8 d( D+ ]# ?5 n/ K

6黄成龙，毛秉智. 骨髓移植后GVHD发病机制及防治研究概况. 中国实验血液学杂志,1994; 2:133-1398 i" n! @. D. c' I  w1 n- i
) ?) z3 R# \2 b$ K, b2 f$ X

) ?; R% P. O" w% J
7居小萍,王健民.  细胞因子在急性移植物抗宿主病中的作用. 中国实验血液学杂志, 2000;8:312-315- A8 [& Q0 Y. I1 r( G3 Z; C1 V

6 ^. ^/ }. ^' ~; @) L
0 h6 S( Z' |7 y3 i  z  q3 i- ~
8van DenBrink MR, Moore E, Horndasch KJ, et al. Fasdeficient lpr mice are more susceptible to graftversushost disease. J Immunol, 2000; 164; 469-480+ Z3 O+ v" R9 M
' `  G# u% o& U7 H7 v9 s& d+ U$ G

; {( S# [) ?9 ^6 p
9Heath VL, Kurata H, Lee HJ, et al.  Checkpoints in the regulation of T helper 1 responses. Curr Top Microbiol  Immunol, 2002; 266:23-27
- l* C; {' T, u( _

2 [; {; w7 K6 a& h- @
10任莉莉，李富荣.  IL  18 在免疫相关性疾病发病机制中的意义. 广东医学，2

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