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同种异基因造血干细胞移植受者血清白介素18水平与急性移植物抗宿主病的关系

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发表于 2009-3-3 12:37 |显示全部帖子
作者:柳金,  张献共,  陆道培作者单位:北京大学人民医院血液病研究所,北京  100044;  1北京大学深圳医院血液科,深圳  518036
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          【摘要】    本研究探讨同种异基因造血干细胞移植(alloHSCT)受者血清白介素18(IL18)与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系,查明血清IL18在aGVHD发病中的作用,为临床早期预测aGVHD提供可靠指标。采用双夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测62例alloHSCT患者移植前及移植后aGVHD发生前后血清IL18表达水平。62例患者被分为5组:A组为无aGVHD移植前组(28例),指移植后没有发生aGVHD的患者在移植前收集的标本;B组为有aGVHD移植前组(34例), 指移植后发生aGVHD的患者在移植前收集的标本;C组为aGVHD症状前组(34例), 指临床出现I-II级aGVHD症状前3-4天的标本;然后根据I-II级aGVHD患者治疗后,有无进展至III-IV级回顾性地将aGVHD前组患者分为疗效好组(18例)和疗效差组(16例);D组为I-II级 aGVHD组;E组为III-IV级aGVHD组(16例)。结果表明:  34例患者发生I-II级aGVHD,其中16例aGVHD进展至III-IV级;发生aGVHD患者的血清IL18表达水平显著高于未发生aGVHD患者, 血清IL18表达水平上升发生在aGVHD临床症状出现前3天左右;血清IL18表达水平与aGVHD的严重程度呈正相关,与HLA配型、预处理方案及感染无关;aGVHD早期血清IL18表达水平与预后相关;血清IL18高表达者aGVHD容易进展至IIIIV级。结论: 血清IL18 与aGVHD的发病相关联,检测血清IL18 水平有助于aGVHD早期诊断,血清IL18表达水平可作为评估aGVHD病情、判断预后的指标。
$ _  ^, u# q  J  u2 n* Q7 [/ e          【关键词】同种异基因造血干细胞移植 白介素18  急性移植物抗宿主病 早期预测
7 u' Z# W" x% o* j                    Correlation betweenSerum Levels of IL18 and Acute Graft Versus Host Disease inPatients after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation
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& h; h: S6 v! p& n1 m9 F+ cLIU Jin*, ZHANG XianGong1, LU DaoPei, o& Y: i9 j$ J7 P

9 K/ b5 a2 |6 d7 E5 M9 QInstitute of Hematology, People Hospital, PekingUniversity, Beijing 100044, China;1Department of Hematology, Shenzhen Hospital, Peking University, Shenzhen 518036, China
" d) L6 t. s9 T/ [7 ~" t
$ m* u9 @& m; q( j  t" sAbstractThis study was aimed to investigatethe correlation between the serum levels of IL18 and acute graft versus host disease (aGVHD) inpatientsreceived allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (alloHSCT),andto explore therole of serum IL18 levels in the pathogenesis of aGVHD so asto provide a reliable and early indicator for the diagnosis of aGVHD.62 patientsreceived alloHSCT were enrolled in this study. Before and after transplantation, as well as at onset of aGVHD. the serum levels of IL18 were analyzed by ELISA.62 patients were divided into 5 groups:group A without aGVHD(28 cases) referred to the patients who had no aGVHDafter transplantation and whose specimen were collected before transplantation; group B with aGVHD before transplantation (34 cases) referred to the patients who had aGVHDafter transplantation and whose specimen were collected before transplantation; group C before the onset of aGVHD (34 cases) referred topatientswith I-II grade a GVHDwhosespecimen were collected before 3-4 days, and according to whetherthe I-II grade aGVHD patients developed III-IV grade or not after treatment, these patientswere divided into two subgroupsretrospectively, onesubgroup had good curative effect ( 18 cases) and the other subgrouphad not (16 cases); groupD with I-II grade aGVHD; group E with III-IV grade aGVHD (16 cases).The results showed that34 patients developed I-II grade aGVHD, then out of them 16 patients (16/34) developed III-IVgrade aGVHD. The serum levels of IL18 in these patients withaGVHD were higher than that inpatients withoutaGVHD.About 3 days before onset of aGVHD, the serum levels of IL18 started to increase. The serum levels of IL18 were correlated with the severity of aGVHD, but no correlation was found with infection, conditioning regimens and disparity of HLAtyping. The serum levels of IL18 in the early stage of aGVHD were correlated with prognosis. The aGVHD of patients with higher serum levels of IL18 easy developed toIIIIV grade aGVHD. It is concluded that the serum level of IL18 in the patients received alloHSCT is related to the occurrenceof aGVHD. Detections of serum IL18 are helpful for the early diagnosis of aGVHD, and the serum levels of IL18 may be considered as a reliable indicator to evaluate the prognosis and severity of aGVHD.1 l  u' G9 w, y' C+ }/ ~# T
* D/ p2 u( R9 U) Z4 J# G1 v+ w
Key wordsallogeneic hematopoietic stem cell transplantation; IL18; acute graftversushost disease;early prediction, ]4 ~9 F0 u) }5 p5 I9 x2 q* }
- o$ A, T+ f& v" W+ T: X& a
J Exp Hematol 2007; 15(3):553-5573 B1 ^+ m; e/ O  U
5 ], E1 l- v3 q6 x/ s  |
中国实验血液学杂志J Exp Hematol 2007; 15(3)同种异基因造血干细胞移植受者血清白介素18水平和急性移植物抗宿主病的关系急性移植物抗宿主病(aGVHD)是同种异基因造血干细胞移植(alloHSCT)的主要并发症之一。已有的研究表明,aGVHD 发生与细胞因子密切相关[1-4]。目前临床上主要根据皮肤、肝脏、胃肠道受累症状的出现和程度对aGVHD进行诊断和分级,缺乏直接的免疫学证据,因此需要寻找一种能够直观、实时反映aGVHD的免疫学指标。本研究采用双夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测62例alloHSCT患者(其中HLA配型不合/单倍型相合的34例)移植前及移植后aGVHD发生时血清IL18表达水平,以探讨血清IL18在aGVHD发病中的作用,为临床早期诊断aGVHD提供可靠指标。至今为止,有关alloHSCT后血清IL18水平报道,均为HLA全相合单纯alloBMT或alloPBSCT受者血清IL18水平检测结果,我们第一次报道HLA配型不合/单倍型相合alloBMT加alloPBSCT受者血清IL18水平与aGVHD的关系。
& r! U5 Y/ A* k) @1 i) |' j
/ e# [- h& Y+ e材料和方法) ]* k' T9 P) S

# F' k  [+ `9 k- j" Z" b病例, h) j: {' d9 v. Y+ v
8 {8 a7 p5 O$ a8 L8 P! G
62例alloHSCT患者为2004年1月至2004年11月期间北京大学人民医院血液病研究所骨髓移植病房住院病人, 男43例,女19例,中位年龄30(9-49)岁。62例中诊断为急性淋巴细胞白血病(ALL)13例, 急性髓系白血病(AML)15例, 慢性髓系白血病(CML)27例,骨髓增生异常综合征(MDS)3例,非霍杰金淋巴瘤(NHL)2例,再生障碍性贫血(AA)1例,多发性骨髓瘤(MM)1例。HLA配型全相合28例,HLA配型不合34例,1个位点不合4例,2个位点不合18例,3个位点不合12例。所有患者均签署知情同意书。本研究选择34例I-II级aGVHD患者(HLA配型不合和全相合分别为20和14例),其中16例为I-II级进展至III-IV级aGVHD患者(HLA配型不合和全相合分别9例和7例),同时选择28例无aGVHD患者作为对比(其中HLA配型不合和全相合各14例)。aGVHD的诊断及分级参照参考文献[5]。62例患者分为5组: A组为无aGVHD移植前组(28例),指移植后没有发生aGVHD的患者在移植前收集的标本; B组为aGVHD移植前组(34例), 指移植后发生aGVHD的患者在移植前收集的标本; C组为aGVHD症状前组(34例), 指临床出现I-II级aGVHD症状前3-4天的标本, 根据I-II级aGVHD患者治疗后,有无进展至III-IV级回顾性将aGVHD前组患者分为疗效好组(18例)和疗效差组(16例); D组为I-II级 aGVHD组; E组III-IV级aGVHD组(16例)。28例无aGVHD组与34例有aGVHD组中位年龄无显著差异(P>0.05)。另设感染组(24例),是指没有合并aGVHD时单纯感染患者的标本。
. ~0 G; m; U; E6 h3 ~
/ S+ K6 M  T  M! g  A( ^2 u" j血清标本采集2 G) K/ Z2 X2 t5 d! r

' M; m8 Y, Z. J) \$ i  F+ H分别于移植预处理前、预处理后输注干细胞前,移植后住院期间每周1、4采集外周静脉血标本5ml,血液标本经离心后取血清于-80度冻存备用。8 K8 H' [) k0 J8 ]8 N2 O

2 m# I9 H! i8 M% {; v9 L+ R( P血清IL18检测  z1 t7 F2 F/ h, E) _+ @
8 U% p$ }9 S6 M  w
患者血清IL18水平采用人IL18试剂盒(由深圳市炬英生物科技有限公司提供)用ELISA法检测。主要步骤如下:在微孔板留一空白对照孔,其他孔加血清标本或不同浓度标准品100 μl,加入50 μl生物素标记的抗体;室温孵育3小时后洗涤3次,加入100μl酶结合物;室温孵育30分钟后洗涤3次,加入100μl底物;室温避光,显色12至15分钟,加100μl硫酸,终止反应,450nm处读取OD值。试剂盒的最小检测浓度为45pg/ml。4 {0 S8 E- j7 ]5 q, M

! J/ c+ J" e4 d2 D) vHLA配型、预处理方案 、供者造血干细胞动员及采集 、GVHD预防、植活检测: D+ l* m" S5 ]: f; ?/ c

3 i) U! F, b1 g( u$ k7 V5 m% oHLA配型A、B位点检测方法为低分辨方法,DR位点采用高分辨方法。* h# ~9 g2 z2 _

; K1 |& Z' J' m/ j# ]预处理方案阿糖胞苷4 g/m2,HLA配型全相合者用1天(移植前10天),HLA配型不合者用2天(移植前10,移植前9天);Bu(马利兰) 2 mg/(kg·d)3天; 环磷酰胺1.8 g/(m2·d)2天;甲基环己亚硝脲(MeCCNu)250 mg/m21天。+ j$ \6 Y) Y; R# c$ @

) k# M' P; u& T& f$ ^$ h! ^供者造血干细胞动员及采集供者接受rhGCSF(日本中外制药株式会社产品)5 μg/(kg·d),连续皮下注射5-6天,第4天采集骨髓有核细胞;第5至6天采集PBSC,总单个有核细胞数(3-4)108/kg。- k* V' p* L0 o7 r; }* T

, G+ S+ @& v5 vGVHD预防在经典的环孢菌素A加短程甲氨喋呤方案基础上,加用霉酚酸酯,HLA配型不合者加用抗人胸腺细胞球蛋白预防GVHD。' T4 D0 }5 e" S0 `5 Z
& L4 w  h% l. _# \9 L0 ]
植活检测造血重建均经性染色体、PCRSTR指纹图或HLA不合位点位点配型中2项以上证实为完全嵌合体。) P' W/ l2 t; I% h
. ]' b6 `& U( |- g; R6 ~
以上内容详见文献报道[5]。
; ^) }7 l3 j; x3 {1 B. j
: |& {* l4 W4 n; @- X9 X- P$ L$ i结果
: ~' a5 {  E7 [8 ~9 p3 g3 e$ P! c8 L0 ^. K4 b( @) h. M# n9 V
造血重建
) o% _# G1 X7 x) s6 x
1 U4 j0 e  U5 L* h2 ]/ @7 A3 g* [28例无aGVHD组与34例aGVHD组输注有核细胞数分别为(8.12±3.31)108/kg、(7.60±3.0)108/kg,两者无显著差异(P>0.05)。所有患者均获得造血重建,移植后中性粒细胞>0.5109/L的中位时间在合并aGVHD组为14(10-20)天,而在无aGVHD组为15(11-25)天,两者无显著性差别(P>0.05)。, x8 H* s! _( u2 w

: C& G0 p* p% b: }% r血清IL18与aGVHD发病关系
4 H1 x- T/ ^$ q; K1 b' N
0 b' X8 ]+ [1 q9 D% h0 l5 J34例合并aGVHD组与28例无aGVHD组之间移植前血清IL18水平分别为72.01±27.18、68.89±27.95 pg/ml,两组无显著差异(P>0.05);移植后合并aGVHD患者,发生III-IV级aGVHD组血清IL18水平高于I -II级GVHD组(P/ J  k7 `* G6 W7 O" k

0 N! u+ u! W  x5 d* V1 [; jaGVHD患者血清IL18表达水平动态变化4 Z' j# \# F- t; Q

' }4 I" k. W3 D5 ?5 B* \7 v5 i18例I-II级aGHVD患者患病时与治疗缓解后血清IL18水平分别为396.26±56.44和230.72±46.15 pg/ml,前后比较差异显著(P  j# \4 {' E4 m3 A! B

1 e# [% d) A1 B3 {2 K5 m- q血清IL18与aGVHD预后关系/ `( L) u' d/ S0 y5 i

' s& x) w" G( c8 [; Q根据有无进展至III-IV级aGVHD,回顾性地将34例aGVHD症状前组患者分为疗效好组(n=18)和疗效差组(n=16),两组血清IL18值分别为317.88±47.29和499.46±102.18 pg/ml, 疗效差组血清IL18水平显著高于疗效好组(P/ g$ q, E) t  t  A- l5 I$ b

5 [/ Q) E' {+ V7 U7 U血清IL18与感染关系0 Y. K  t( n2 [9 L1 l

/ V, j' j  x2 k7 B' p! F检测了24例患者移植前与感染发生时血清IL18的水平,分别为69.33±26.57和82.86±31.51 pg/ml,前后比较差异无显著性(P>0.05)。
. X( A! h: o( Z9 \$ J2 V7 l8 o1 h- u$ F% @" Z
血清IL18与预处理方案关系
. ~5 H( B7 H/ y! z6 o, \) I2 V) O' \  \- x
检测34例单倍型相合患者预处理前与预处理后血清IL18表达水平,两组分别为67.27±27.72和80.7±29.54pg/ml,无显著差异(P>0.05)。
% t9 a* }: z3 g- \
) Q: d' k2 k- }0 |9 j血清IL18与HLA配型关系3 n& p2 }" M. ~

( U3 r* J6 D8 f  lHLA配型全合组与不合组患者在移植前、移植后aGVHD时血清IL18水平比较显示,全相合组与不相合组无显著差异(P>0.05),但无论是HLA配型全相合组与不相合组患者, aGVHD症状前组、I-II级aGVHD组、III-IV级aGVHD组血清IL18水平,与移植前比较均显著升高(P9 F/ X# E. p7 Z  j( N

# G) _% _# P. P  }讨论6 M3 j3 p* ]$ w; `6 K& A

0 |. U* X4 g4 l- vaGVHD的发病机制为造血干细胞移植供者的T淋巴细胞被受者组织抗原激活,这些细胞的增殖、活化与多种细胞因子(CK)及表面分化抗原(CD分子)有关。GVHD发病机制研究发现,CD4 细胞中辅助性T淋巴细胞1(Th1)亚群与GVHD相关,Th1细胞主要分泌IL2,INFγ等(I型炎症因子),IL2和IFNγ在aGVHD发病中起关键作用,控制和放大对异体抗原的免疫应答,并刺激单核细胞分泌多种炎性细胞因子,最终导致aGVHD靶组织的损伤,而细胞因子IL4和IL10在aGVHD的发病过程中起抑制作用[6,7]。Fas/FasL系统是介导凋亡的主要途径,表达于包括GVHD靶器官在内的多种器官,鼠实验表明,Fas缺陷者移植后GVHD发生及致死率较高,并伴有血清IFNγ与TNFa水平升高,提示Fas/FasL也参与了GVHD的发病机制[8]。IL18是1995年发现的一种细胞因子, 是18.3 kD的蛋白质。IL18具有如下免疫调节活性:①促进T细胞增殖,增强Th1单克隆和富集的多克隆T细胞产生Th1类细胞因子,增强Th1细胞毒效应 ,同时可以抑制IL4和IL10的产生[9];②增加NK细胞的细胞毒作用:在体外实验中, IL 18 可以增强外周血和脾脏天然杀伤细胞的活性,明显增强NK细胞的细胞毒作用,且呈剂量依赖性;③直接增强FasL 介导的Th1 细胞毒效应[10] 。因此,我们设想IL18在造血干细胞移植后的aGVHD发病中起着重要的作用。6 R! `, U! I' @& a) m4 t" Z
+ f: P: l+ \- s6 V2 _
国内外有关alloHSCT后血清IL18水平报道较少,所见的均为HLA全相合单纯alloBMT或alloPBSCT受者IL18水平检测结果,未见HLA配型不相合/单倍相合alloBMT加alloPBSCT受者血清IL18水平报道。 Fujimori 等[1]用ELISA法检测37 例恶性血液病alloBMT前后血清IL18 水平,aGVHD病人血清IL18 的浓度明显增高并且与其严重程度相一致,在aGVHD得到适当的治疗后,血清 IL18 的水平降至正常,血清IL18 水平不受移植前化疗方案、移植物或细菌感染的影响,提示IL18 在aGVHD 的病理过程中可能起重要的作用,血清IL18 的水平对预测aGVHD是有价值的。Nakamura等[2]检测18例alloBMT后血清IL18浓度,国内徐敏等[3]和居小萍等[4]分别检测10例和15例alloPBSCT后GVHD患者IL18 水平,结果与上述报道一致。
- [% ^# B( s/ S! h, E* y( y  q, X2 ?8 B
我们检测并比较28例HLA相合、34例HLA配型不相合/单倍相合HSCT受者血清IL18 水平,结果发现IL18 水平与HLA配型无关,无论HLA相合、还是HLA配型不合/单倍型相合造血干细胞移植受者中发生aGVHD患者的IL18表达水平均显著高于未发生aGVHD患者, IL18表达水平与aGVHD的严重程度呈正相关, 与文献报道一致,提示血清IL18水平 与aGVHD的发病相关联,检测血清IL18 水平有助于aGVHD早期诊断。本组结果显示,在aGVHD早期时, 疗效差,进展至IIIIV级aGVHD组血清IL18 水平显著高于疗效好组,这提示血清IL18水平在一定程度上可作为判断aGVHD的预后指标。目前对aGVHD的防治较为困难,常用的药物如环孢菌素等对某些进展或重度aGVHD患者疗效可能不佳,早期诊治可以及时控制aGVHD发展,改善预后。但目前临床上主要根据症状的出现和程度对aGVHD进行诊断,缺乏直接的免疫学证据,早期症状往往不典型,且容易与感染混淆,以至延误治疗。本研究证实,血清IL18表达水平与感染的发生无关,而发生aGVHD患者的血清IL18表达水平显著升高,血清IL18表达水平在aGVHD 临床症状出现前3天左右已经明显上升,提示检测血清IL18 水平对aGVHD有较高的特异性,有利于早期预测aGVHD。
6 o9 S2 B' \5 C          【参考文献】* L7 l* @7 c- P  h6 X* r
  1Fujimori Y, Takatsuka H, Takemoto Y, et al. Elevated interleukin18 levels during acute graftversushost disease after allogeneic bone marrow transplantation. Br J Haematol, 2000; 109:652-657
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6 L9 f, ^- }) ?* f
    2Nakamura H, Komatsu K, Ayaki M, et al. Serum levels of soluble IL2 receptor, IL12, IL18,  and IFNgamma in patients with acute graftversushost disease after allogeneic bone marrow transplantation. J Allergy Clin Immunol,  2000; 106(pt2):S45-S50
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    3徐敏, 刘国强,邢健等. 细胞因子与急性移植物抗宿主病的关系. 中华内科杂志,2005; 44:170-1357 x5 ]/ F/ d- @) E! \# @5 N' C0 C$ D
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# M# C0 [- v  W8 R" W* a    10任莉莉,李富荣.  IL  18 在免疫相关性疾病发病机制中的意义. 广东医学,2

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发表于 2015-6-10 16:28 |显示全部帖子
赚点分不容易啊  

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好啊,,不错、、、、  

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说嘛1~~~想说什么就说什么嘛~~  

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只有一条路不能选择——那就是放弃的路;只有一条路不能拒绝——那就是成长的路。  

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包包
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发表于 2015-8-31 16:01 |显示全部帖子
希望大家都有好运  

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包包
1551  
发表于 2015-9-20 08:27 |显示全部帖子
不错 不错  比我强多了  

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包包
1609  
发表于 2015-9-29 12:17 |显示全部帖子
文笔流畅,修辞得体,深得魏晋诸朝遗风,更将唐风宋骨发扬得入木三分,能在有生之年看见楼主的这个帖子。实在是我三生之幸啊。  
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