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求救:细胞低密度传代第四代不长了 [复制链接]

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包包
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帅哥研究员 积极份子

楼主
发表于 2010-11-15 22:15 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本人十月中旬将一个百分之八十密度的三代细胞稀释传代,由于没有多少概念,导致传代密度过低十万左右,是用DMEM+10%FBS种在10cm的培养基上,现在过了一个月了,细胞只长到60%左右停止生长了,请高手指点一下!为什么低密度培养细胞会这么容易老化!谢谢!
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沙发
发表于 2010-11-15 22:17 |只看该作者
建议你上图 更直观

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藤椅
发表于 2010-11-15 22:20 |只看该作者
晕,如果你以一个外人的角度看你现在写的东西,肯定一头雾水。

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板凳
发表于 2010-11-15 22:21 |只看该作者
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细胞密度过高过低都不行吧 但是到底哪个是合适密度 我也不是很清楚3 ^5 _$ W7 ]) H7 w/ S, S0 f" I: ^
现在仍在摸索中  如一传二或一传三
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报纸
发表于 2010-11-15 23:05 |只看该作者
本帖最后由 quit6927 于 2010-11-15 23:07 编辑
; [, W" _- e2 |) l  H( m
6 H0 p5 z1 l" T3 A- f% R不会的,MSC低密度应该更好,我们一般用5000个/cm2,1000/cm2也是没有问题的。参考下这篇文章吧。
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地板
发表于 2010-11-15 23:20 |只看该作者
你怎么确定它老化了呢?首先你及时换液了吗?要保证培养液新鲜,换液前可用PBS轻轻洗一下。其次考虑培养基的PH值是否合适,一般7.2-7.4最适。你可以适当加大FBS的浓度,15%-20%均可。注意细胞状态要是不好,在换液时培养液和PBS在用前最好在培养箱温育一下。一般3-5代的生命力很旺盛的。
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帅哥研究员 积极份子

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发表于 2010-11-16 11:27 |只看该作者
回复 6# 若兰汀 / q0 Z4 D: U! ]* V8 _3 }
4 [) @2 u. a. L
大概一个星期左右就停止了生长了,中途换过几次液,用PBS冲洗过。培养基用来培养过其他细胞没有此类问题,每次换液时PBS和培养液都37度温育15分钟左右。我现在不确定它已经老化但是可以确定已经停止生长了。我试下加大FBS的浓度吧!
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帅哥研究员 积极份子

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发表于 2010-11-16 12:42 |只看该作者
图片我传了两张,一个4倍,一个40倍的,没有发现老化现象!只是一直没有长了!
0 ~5 d5 m9 s) Q& W4 v- o6 N我想请高手帮我解答:1为什么会出现生长停止,而且大概一周左右,细胞形态正常,培养基正常更换!9 h* K, {# q  f8 U; B3 E( r1 c
                    2我的细胞出现老化的概率是不是比较大,它为什么会老化,谁有这方面机理的文章!
$ q9 m- i* _8 m4 e: k: P                     3谢谢!
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发表于 2010-11-16 13:06 |只看该作者
细胞不分裂很正常,继续保持换液,不要太勤,颜色变化再换液。元代培养很难,不可能说长就长,你这不长还是好事情,我们实验室的做元代,动不动到了多少代就大片大片地死。告诉你经验:就是千万别放弃,放那个地方说不定哪天那几个细胞就通过G0期了,你就爽了。加点生长因子也可以吧。
; t$ v! V! _! Z; R, x/ q" n9 M你细胞挺正常的,没有老化,元代就这熊样。
: j% E4 ]; j. A/ H0 T' F+ g不要放弃,养着就行。" J! y8 h8 b* e) ^  q
我个人觉得,细胞从低密度长满平,这样状态会更好。不是密度的原因。
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帅哥研究员 积极份子

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发表于 2010-11-16 17:09 |只看该作者
回复 9# yuhaoze
8 v, U- C+ ^1 {/ o" q. R
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% C' D/ I7 }3 C% _6 t# c    呵呵,谢谢!
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