细胞虐我千百遍??我待细胞如初恋 - 实验室综合讨论区干细胞之家



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

返回列表

查看: 30687\|回复: 7	go [资料分享] 细胞虐我千百遍??我待细胞如初恋 [复制链接]

highlight

注册会员

Rank: 2

积分: 104
威望: 104
包包: 1739

楼主

发表于 2016-6-23 20:47 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

　细胞培养的过程大概是这样的：失败—成功—体味—收获—思考—交流，你到了哪个阶段？不妨和我们一起来看看丁香园上各位站友养细胞的那些事。6 ^! k0 X3 @' J2 N9 f/ X5 i
/ C  N2 Z( V# _, Q5 A  g
　　1 ! C' O: U" K( P2 q9 u! j, I
1 B+ F) i1 C2 l& V5 `
　　心肌细胞培养体会
) S0 H  S4 W. N9 E* q# I
　　作者：windboy777 d3 V1 e9 W/ i% j6 q7 P' F  [

　　记得刚养心肌细胞时候，开始时候很顺利，但有一次突然细胞就不怎么贴壁了，换液时候一吹打，就发现有许多细胞脱落。我检查了培养箱，可是别人的细胞都长的很好，培养基的问题？我仔细观察了一下，培养基粉红透亮，绝对不会污染，血清也没有问题，大家都是公用的血清。5 r. C4 P% P- U' d- Y1 s, }9 a8 C

　　当时我很迷惑，后来我向老师如实反映问题，他听完我的叙述后想了想，让我把培养基拿给他看，然后告诉我，你的培养基颜色太深了，肯定偏碱，细胞在偏碱的情况下培养，耐受能力会逐渐下降，可能是产生脱壁现象的原因。
  g$ y  n5 C4 P. h3 w. w6 _
　　后来我重新测了一下培养基，为 7.5 左右，我用灭菌的 HCL 调了一下，培养基颜色变成淡红透亮。再次培养，发现细胞贴壁比较好了，搏动效果也不错。因此，我以后每次培养前都要重新调好 pH 值，我觉得很多因素是能影响 pH 值的，这也算是实验的一点收获吧。( Q8 i" A+ k9 ]9 b( Z

　　2 + e' N. B; n, V
: T4 z; I5 i& E! P' f( t& c
　　低级错误浪费时间 2 x* [/ f. f: S# x$ E! i

　　作者：冬日阳光
, [& R. c6 y# E+ o/ w' G& I/ R
　　在做实验时经常会有一些低级错误的发生，例如，我在做细胞免疫组化时就发生了这样的一个错误：我的细胞是养在 24 孔板里的，细胞固定时我就直接加入了丙酮固定，结果板子里面一片白白的，这时才赶紧询问他人，方知塑料制品会被丙酮所溶，真是好笨。
8 E4 G  K+ |: M; T2 _, I# }
　　另有一次，我做细胞爬片时，因为觉得盖玻片不好处理，就自做主张地用了载玻片，那可是我自己花钱去做的小玻片。结果是虽然细胞长在了上面，但是用荧光显微镜观察细胞染色情况时却怎么也看不清楚，换用了盖玻片就好了。结果被实验室主任训了一顿：谁让你自做主张换玻片的？唉，不仅花了钱，浪费了时间，白费了心血，才得出这样的结论。9 z2 {/ u" H. N9 V: \1 s# z; Z, ?& V

　　3 6 A& S  u; Q: a8 O8 S% N7 N$ e
1 ^# C  l$ h6 G# ^5 r8 l: e
　　昆虫细胞培养体会

　　作者：savid888

　　鄙人也算养了快一年的昆虫细胞了，而且最近又在做昆虫血液的原代培养，积累了点点经验，说出来大家共勉。, X& ^; N2 w# f+ Y9 p5 n

　　首先，要广泛阅读细胞培养方面的专业书籍，打造自己扎实的专业基础，为以后的操作做准备。这方面的书有很多，《体外培养的原理与技术》，薛庆善主编，科学出版社；《细胞实验指南》，D.L.斯佩克特，etc著，黄培堂等译；《细胞培养》，司徒镇强等。7 g9 z( Q8 x* ]8 f

　　其次，每种细胞的培养条件都不相同，别人的经验和书本上的 protocal 都只能作为参考，真正重要的是自己培养过程中的不断摸索，这就需要对自己培养过程中细胞出现的状况作详细记录，随时总结。: O) _5 n* h( x! B+ R. E+ ~

　　再次，培养要有极大的耐心，过程中的影响因素又很多，这又是细活，其过程需要考虑各种影响因素，当出现问题时一一加以排除，找到最佳解决方案。我在这里没有讨论细胞培养的细节问题，因为那样的话是说不完的。

　　4 6 l* Y: x4 ~( N3 }3 D
1 C6 v& d+ J  S  h8 J; A0 o! Y
　　如何防止细胞污染
; O$ y1 k3 E0 v% a
　　作者：tangdl2000
0 O) f. j% g) L. D
　　我就怎样防止污染说说我的体会。每个人都担心细胞被污染，每个人都有碰到自己的细胞被污染。起初我学习细胞培养的时候，都是向师哥师姐学习，基本上就是依葫芦画瓢。随着时间的推移，自己也就觉得有些步骤可以省略，有些就要注意。
$ Q$ ?+ d* T  Z# I5 G; O- A
　　我个人认为比较重要的几点如下：2 R5 m+ I) t( F' g" W4 }
•
东西一定要用自己的。既不要借别人的，也不要借给别人。可能大家觉得比较自私。实际上还是很有好处的。并不是每个人的操作都规范，因此相互之间串着用，很容易造成交叉污染。
/ g, j" Z- o- @$ h! k* f+ a3 A$ E
•
我习惯口对口倒液体，在倒前倒后都要在酒精灯上过一下。自己认为比起用吸管吸更能很好的防止污染。步骤越简单，越能防止污染，而且还能节省很多吸管。3 N) h6 |! [& X( l- |
5 q7 \4 }& V6 n0 w9 _: S! \' ]
•$ J9 z# c2 }' I' u
一次将所有的所需要试剂、工具放入工作台。不要做到半路，又出工作间拿东西，这样增加了污染的机会。: f4 @9 l& @7 l0 Y
4 _1 r* R$ O" }$ c: u4 G. d
•
整个操作要快、动作要轻、而且不要干其他的事情。比如手机响了，最好不要接。我一般操作的时候将手机关了，手机声音响起，好烦躁。

•
我一般开紫外线照射台的时候，就将培养基、酶、DHANKS 液拿到室外让它自然升温。这样 40 分钟后，温度也升上来了。有很多人将他放到 37 度水浴锅里加热。一定要注意水浴锅的卫生，有的常年不清洗，里面很脏，容易在外面瓶身上吸附大量细菌。因此用它的也一定要勤换水。从水浴锅拿出后，最好找个毛巾插干上面的水。3 ]+ f$ l) S2 l

•6 a+ a3 U, O# }; r
操作前要洗手，用 75% 酒精搽手。8 r# ^$ W. M4 d6 b3 T

•* e9 {; D  a9 S4 B
用完操作台，要打扫卫生。

•
细胞要经常冻存，我一般只要细胞状态好就将细胞冻存起来。细胞状态差了，扔掉，重新复苏。这是一个必须养成的习惯。毕竟很多情况下，细胞并不是因为污染了，才让你感到头痛。这样你不会担心没有种子了。) K. {% l+ N3 ?! F9 r8 @7 N

•
我一般是不加双抗的，只要注意，不会污染。
2 b, V! j: t& y5 Z. D7 N; i
6 {9 g8 h: @& T9 b. H: j
　　5
( ~7 A4 i- {0 k7 Z
　　纤维细胞培养经验
& l8 C' B9 d4 g1 g8 A
　　作者：xiaoyuaizuguo9 s% y0 P4 M; `2 U  X4 Y# C) q

　　我曾经在自己制作的无细胞真皮上养过成纤维细胞，无细胞真皮是按照文献的方法制作的，把成纤维细胞接种到无细胞真皮上的方法也是按书和文献中的方法。可是很奇怪，成纤维细胞怎么都不长，我重复了好多次，结果都是失败。后来又做了对照，同样的条件，一个平皿中直接接种成纤维细胞，另一个平皿中放入无细胞真皮，再接种成纤维细胞，结果，没有无细胞真皮的平皿中细胞长得很好。$ k+ E* e6 k7 ^/ B8 n; \( P

　　这样说明不是细胞和平皿的问题，那么问题在哪里呢？我苦思了很久，觉得是不是无细胞真皮在处理的过程中用到了一些化学药品，对细胞的生长有害，可是在接种细胞以前我已经按文献上的方法将无细胞真皮用 DMEM 培养液浸泡了48 小时，在后来的实验中我就将浸泡的时间延长，并在中间每天换浸泡液一次，经过 5 天的浸泡以后，成纤维细胞的接种最终成功了。) k# E. u& _# H# L# Q

　　这份迟到的成功提醒我，对于书和文献上的东西，不能不信，也不能全信，很多东西还得靠自己在实验中摸索。* w4 S9 G" T+ U0 t2 G  N/ B. ~9 \

　　6 % j+ b  l/ f  m( C0 h, c

　　悬浮细胞培养经验
; D$ i* a1 f$ Y; s
　　作者：liuhl ( }8 w" L" s0 z  C/ J. q

　　1. 无菌操作是一切技术的基础，切记此条。
! [% ?6 W1 v% i1 i- T% x* a
　　2.在细胞状态好时，乘胜追击，准备好一切所需要的细胞原料。
•
实验同时需要采用 FCM 检测药物干预后细胞周期的改变，需要做 IHC，Werstern Blot，RT－PCR 等时，可以现将细胞处理好后，根据不同的实验步骤，保存细胞标本，然后各个击破，这样可以减少实验时间。
: q5 M7 j5 Z2 c- {8 d  `
•0 G  _% J( W' I
如要收集不同浓度点和时间点的标本，细胞处理后，部分用来做流式测周期（固定那步可以放置 -20 度数日，待标本收集全后一起检测）。部分用来细胞涂片（固定后，可以放 -20 度数月，本人曾放置 3 月没影响）。部分用来做 Werstern Blot（将细胞离心呈粉末状置 -80 度保存，或者提取蛋白变性后保存，粉末保存时间可达 2 月）。部分用于提取 RNA 时，可现加上Trizol 混匀后，置 -80 度保存。

•
原料准备好后，在根据自己的时间进行合理安排，多出时间查阅文献。
: M% M1 q) D  L2 D  m6 q

　　3. 在进行每个实验时，一定要找到该实验的详细的 Protocal，一步一步踏踏实实的完成，一般都会得到比较理想的结果。