关于UEA染色的问题

Diane0321

实验需要标记epc，想做个UEA染色，想请教一下各位，是消化成细胞悬液再染色，还是直接染贴壁的细胞呢？这两者各有什么优缺点？染色对细胞的影响大不大？会造成细胞死亡吗？染完之后荧光能持续多久呢？以下是我准备的实验步骤，还请大家批评指正，谢谢！
( u. V  ]0 I& S1 |(1)        用TrypLE酶消化EPCs；
  D+ u3 X1 @- d8 Z(2)        用2ml DPBS将消化后的细胞洗涤一次；
9 {% g2 l1 _3 ~* ~(3)        将收集的EPCs悬于UEA染液中（染液浓度为2.5μl/ml）；
- ?- B1 B" D3 i! }! t8 e, q3 k3 h(4)        室温下避光染色30min后，用DPBS洗涤两次；
- w; d$ ^8 O! i5 }(5)        将细胞重悬于培养基中。
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honey棉花

想知道你的目的是鉴定不咯？直接染贴壁细胞就可以了
) H7 W0 i& j# @+ f- q( }% G1 F1、体外培养EPCs 至80%融合，弃去培养基，用DPBS 洗涤一次
2 E! Z% k8 M3 N: T  y2、按照1:400 加入UEA-1 染液，37℃孵育20 min （按试剂盒操作说明）% s. d$ W2 V) W5 y. U" p
3、弃去染液并用DPBS洗涤一次后，加入1 ml 4% 多聚甲醛固定液固定15 min 后6 }8 r6 `+ T- E, {5 y
4、弃去固定液并洗涤一次后，加入1 ml 按1:20000 稀释的DIPA 染液染核3 min，* L9 X2 T# w1 k4 `% o" t. F
5、荧光显微镜下观察拍照。' C  Z, i) d. c; |! P  ~- F
在荧光显微镜下可以看到鹅卵石形态的EPC结合UEA-1而成红色，如果不需要染核的话，可以在第2步就进行观察了
+ O9 k- a0 l3 V9 v希望对你有帮助

Diane0321

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: K( E; k+ }- Q5 {6 v/ J& m嗯嗯，非常感谢你的帮助