免疫荧光染色步骤 越详细越好

jenny114402

免疫荧光分为胞内核蛋白和表面蛋白. @) Q) ]+ V7 w' P5 B; E  w
核内蛋白染色步骤：& X: E% o+ f6 c7 d/ N5 m6 Y
1.在24孔板内接种细胞，1ml培养基培养，待细胞长到30%-50%染色9 o. A: T* L5 c+ T+ H3 o6 R
2.吸弃培养基，PBS洗两次
& Y  p2 Z( q9 J0 K9 w0 z3.4%的多聚甲醛固定25min
' F; S% V' i6 M' l* W# e4.PBS洗3遍
8 m/ S. F9 \# V- c  c1 A5.250ul 0.25%TritonX-100，室温20min# d- d$ n4 c; P! x
6.PBS洗3遍; q% I) p% G- H6 G
7.200ul 10%的山羊血清，室温封闭30min( ~# s, ^+ E; h0 n; |& f% y1 A
8.弃封闭液，加一抗，避光4度过夜
9 X6 S9 n! x; Y7 [. w9 ^9.PBS洗3遍, Y0 z# I7 [- Z, F- U" H# e4 [, n
10.加二抗，避光室温2h
& h& a6 H) b' H# O( I  [11.加稀释好的PI/DAPI，避光室温20min
% W6 R6 S- i1 r2 B1 c- J6 c12.PBS洗3遍，镜检。

jenny114402

表面蛋白省去TritonX-100打孔

jenny114402

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8 C  c2 d2 O: y! V9 i1 s% A9 }* g9 f5 ?: b& m2 ~  t
我做的是人的MSC，细胞量是5*103， 第二天做的免疫荧光

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子4 q3 v# j2 M9 D! g8 S4 D, a; N
5 d/ s( t5 q8 A; n9 h  U, t
细胞爬片就是那个玻片是包被过的，有强吸附能力；说白了就是细胞不易洗掉。

jenny114402

回复 倒腾细胞 的帖子/ ]4 Z1 k( x6 b- N, N' P8 c

: c0 A- D+ ~( P, l我说的是5*103是24孔板的细胞量，我们一直都用24孔板做免疫荧光，检测mark有点多

jenny114402

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& A1 m) O) }+ m) Y( t4 x$ i5 l! N9 u6 \  X, }  v
板上细胞长到30-50%就可以做荧光了，如果长得太多，拍出的照片也不好看；你可以消化下来重新接种；请问IF是什么，没接触过，请赐教。