ips诱导和培养中的2个疑问

sizhengliu

各位大侠！小生有疑问，多多指导：4 ?: z1 {* {' _. U5 I# c# _' B
1，关于血清：在ips的诱导重编程阶段，克隆还未出来之前，这段时间可以使用胎牛血清吗？（gibco的澳洲血清）这对感染后细胞的增殖有无帮助？对克隆的出现和形成有无负作用？" H+ h3 ^  u4 ?: L5 l- `
2，关于筛选：在细胞感染病毒后，需不需要进行药物筛选？在克隆形成后，需要怎样筛选合适的克隆进行扩增？
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frankieisme

1.诱导重编程阶段中血清是必须的;7 E- y! M" a/ `; J4 g( q
2.在细胞感染病毒后，需要G418和嘌呤霉素筛选各一次,在克隆形成后不需要筛选.

huangcong1988

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) G& @  U2 `- ~: i: l- R* @
2 D3 x1 [; ]) L1 }# Y1.克隆未出现之前一直需要血清么？不是感染的时候（两到三天时间）含血清，之后换干细胞培养基么？
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huangcong1988

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% d, t2 U& E# I& b
6 v% O7 @5 M( C7 S$ z. M还有就是，血清的作用机理？

sizhengliu

回复 frankieisme 的帖子1 c; P! h* n- D, A) i" Y- T5 c
, m3 N& n6 F" z, p0 X2 _0 f% R) \
1,胎牛血清最晚可以用到什么时候换?* q2 s2 ?/ K1 ?+ [1 t
2，感染后，嘌呤霉素筛选可以终止的条件是什么？
% m" Y1 h1 p4 x) b  }/ @5 F; D谢谢！

frankieisme

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# C: l( T  [( E& m* U+ `
  R) M( |! m# d& z不管是FP medium或者ES medium都含血清,只不过前者是10%,后者是15%;
' W2 z7 ?2 H  s! I/ \嘌呤酶素一般在G418筛选后第4天用,只用一次,之后就每天更换新鲜的ES medium,等到克隆长出来.

frankieisme

回复 huangcong1988 的帖子2 ]0 y6 V; \, n! i( Y  j

9 _3 j' ]" p) _9 ?' Z) uES medium中也含有15%的血清啦.

zmm

回复 sizhengliu 的帖子! z% y' R3 U4 X
  L1 M$ r/ e; b) M4 H
您的细胞是什么物种的？细胞感染后我一般不筛选，而形成克隆后，用活细胞染色进行筛选！

huangcong1988

回复 frankieisme 的帖子5 G8 V% }, R7 T0 ~; W6 `

. }' S1 a, _+ ~: e' V! c6 G7 _/ A您是养小鼠的吧？

huangcong1988

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3 Q$ u; P. S+ ^0 ~, c' z2 q. L/ F9 v+ c9 k) T, {* ]3 m. P  O% N
染色之后克隆还能用么？