关于UEA染色的问题

Diane0321

实验需要标记epc，想做个UEA染色，想请教一下各位，是消化成细胞悬液再染色，还是直接染贴壁的细胞呢？这两者各有什么优缺点？染色对细胞的影响大不大？会造成细胞死亡吗？染完之后荧光能持续多久呢？以下是我准备的实验步骤，还请大家批评指正，谢谢！3 n) V0 P8 ?# Z: v1 J
(1)        用TrypLE酶消化EPCs；
) L2 E7 r0 Y; `" x(2)        用2ml DPBS将消化后的细胞洗涤一次；
$ f- n# m$ N/ X(3)        将收集的EPCs悬于UEA染液中（染液浓度为2.5μl/ml）；: D/ s  J  P! }
(4)        室温下避光染色30min后，用DPBS洗涤两次；
6 U2 U4 K$ G! E% r# a" U(5)        将细胞重悬于培养基中。9 s; W* J2 V& g4 @% I% Z

honey棉花

想知道你的目的是鉴定不咯？直接染贴壁细胞就可以了
7 F+ j& F$ x) e2 j" x1、体外培养EPCs 至80%融合，弃去培养基，用DPBS 洗涤一次
- {% U- M5 T: Y6 c) C4 R2、按照1:400 加入UEA-1 染液，37℃孵育20 min （按试剂盒操作说明）! k, p1 R+ ]! d4 c$ [! l
3、弃去染液并用DPBS洗涤一次后，加入1 ml 4% 多聚甲醛固定液固定15 min 后+ Y6 w2 M, A- p( J
4、弃去固定液并洗涤一次后，加入1 ml 按1:20000 稀释的DIPA 染液染核3 min，
1 W* E# D( y# F. m) j5、荧光显微镜下观察拍照。6 O& {6 k& S9 t
在荧光显微镜下可以看到鹅卵石形态的EPC结合UEA-1而成红色，如果不需要染核的话，可以在第2步就进行观察了# D0 w7 Q3 O9 F$ t
希望对你有帮助

Diane0321

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& P' ], R( n' @  D2 ^/ z0 U- m
# V! {) y: ^5 d嗯嗯，非常感谢你的帮助