关于胚胎干细胞消化用accutase的中止消化问题

shaozi402

我们胚胎干细胞的消化用accutase，用培养基中止消化；但是发现这样有点浪费培养基，培养基很贵的。考虑是不是可以用DMEM/F12来替代胚胎干细胞的培养基来中止消化呢？或者可以用其他的试剂来中止消化？求解，谢谢！

Jonathan

早就说过这个问题了。accutase不是用培养基终止的，你加培养基，只是把accutase稀释了。我一直用F12稀释，一直没问题

sc-cxw

accutase消化不需要终止消化，换种说法即说消化到最佳时间时，只需要加入相应的适当体积的培养基继续培养即可。

shaozi402

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, r5 s& g1 Q. U9 C7 r! a/ Y
/ n- a- Q4 d' M我用F12试了一下，确实可以。

shaozi402

回复 Jonathan 的帖子+ x1 L6 p5 G4 N8 [8 ^* M- J

* x, ~: ~8 |/ F, D% E谢谢

shaozi402

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不需要离心去除吗？
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sc-cxw

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( X4 L0 F1 B4 t6 m% B$ i" p4 q
, y/ o7 c; ]7 n" I, V" j不需要

bubble_w

请问accutase消化到什么程度终止消化最佳？是把细胞吹下来，还是刮下来？

shaozi402

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5 f  P8 T4 {) q5 e
' I- x1 B$ p$ q- F" h克隆球周边卷曲，大约3-5min，即可用细胞吹打下来。

bubble_w

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2 f7 V: @6 p/ H( n% N
吹打下来之后 克隆是小的团块还是已经变为单细胞