关于胚胎干细胞消化用accutase的中止消化问题

susan901017

回复 bubble_w 的帖子7 M; W) }7 c4 s# S& g

, c2 Q% L3 M# E& J  y+ Q6 I! M吹打后是单细胞，偶尔会有小的团块

shaozi402

回复 bubble_w 的帖子- ?6 @; m8 Y3 S$ `

* V; c6 t# i; k9 B9 A: @大都是单个细胞了。

kasaya

Accutase消化细胞根据细胞类型一般是2-5min，第一次如果不确定的话，可以隔一分钟看看细胞分离的情况，一般看见被消化的小细胞团块飘在培养基中就可以通过稀释accutase终止消化了，使用DMEM就可以，然后轻轻地将细胞吹打成单细胞。Accutase虽然很有效率但是对细胞损伤较小，所以可以等细胞被消化成小团再进行吹打，因为为了成为单细胞用力吹打的机械损伤很可能比酶的损伤还大。

watchen198891

回复 shaozi402 的帖子* G7 v+ R6 \3 |9 b" `  C8 S2 D( ]% H

- k2 ~7 P5 ]) G" p* S我想请教个问题，这个酶的使用浓度是多大？

shaozi402

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1 B, d" x' w! P7 j5 c' t; Y, t; g( J$ _4 l& W  b& p
用原液消化

watchen198891

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; `/ N+ _2 x' O' L( N! s
, r8 E2 z  `1 E3 K好的，谢谢，我已经试过了，现在细胞也长起来了。

yeungfan

加入等量DMEM/F12终止消化就可以

BSHT1994

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" V, q. \: v: G$ C
你好，我想请教个问题，消化结束加入培养基稀释，就直接计数接种了吗？不需要离心吗

细胞海洋

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ghy529529

传代是消化成小的团块还是单细胞？