CRISPR/cas9系统中gRNA的设计

runsong

CRISPR/cas9系统中gRNA怎么设计啊
3 b2 ]2 L7 ]# h! r我找的文献说得都不具体
1 `+ i+ y! l, q  N3 s4 F/ z有没有详细一点的步骤？

chips100

参见addgene，说的还算详细。
% c0 i9 p7 O5 b另，能惠赠 CRISPR/cas9系统质粒吗

chips100

http://www.addgene.org/CRISPR/) V- q3 ^& M2 s' w# D6 o8 l
直接给链接，貌似zhang的比较好

quanri1126

根据zhang的site    http://crispr.genome-engineering.org/  选就行了% |9 T8 s" M3 y1 k
exon上的位置 GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NGG  中间20个随机碱基 G+19个N 可以选作一个target  最后的NGG是PAM site
3 i! R( g0 w( K$ D( G9 b  t8 E  a再有根据不同的plasmid 可能长度不同 我买的zhang的plasmid 刚开始做 有问题一起讨论吧

chips100

quanri1126：求惠赠质粒

quanri1126

回复 chips100 的帖子
8 P! U& i( {( [, D* H6 Y; k
/ l. {  C  x/ _+ v2 ^" O我不在中国，而且从addgene 买也很便宜 运费加上质粒不到1000块钱

cywjswsky

回复 quanri1126 的帖子$ ?3 n" Z6 S; i5 I( m

; y4 L/ K3 F6 S5 M5 G: D) k求详细构建之过程

milanello11

回复一下

小桥流水

回复 quanri1126 的帖子
- j+ }4 X/ y. ]2 G
8 S& f" q; x9 }3 c# Z, ~我想问一下，为什么中间是19个碱基呢，如果21个会怎样

小桥流水

回复 quanri1126 的帖子
  B& K) ^7 J! C! g  I  F' I+ b! T* f7 h& a5 X7 A" n
你好，我想请教一下，在cas9中，设计gRNA引物时,用T7启动子，为什么要求靶标序列满足GGN19GG的条件，，还有为什么中间一定要求是19个碱基，如果不是19个会怎样，，还有如果我的基因里面找不到满足这样条件的序列，那该怎么办呢，跪谢，赐教！谢谢！