MEF是先铺后灭活好还是先灭活后铺好？

dilal

MEF作为饲养层是先铺板待长到一定密度再用丝裂霉素灭活好？还是先用丝裂霉素灭活后一定密度铺板好？
/ B" T0 t0 `/ G个人认为，两者都有利弊。前者对于细胞状态的可控性比较好，可以选择细胞状态好的细胞进行灭活，但是不易控制MEF的铺板密度；后者灭活后消化铺板，细胞状态可能会出现波动（消化过程中的各种因素），但对于MEF的铺板密度易于控制。! F* J# H  a0 ?; u' a) T- N1 _, w
不知道各位采用的是那种方法，欢迎大家讨论各自的利弊！

christophe

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: ]9 m( A) C( [' @' p
; U9 v8 r* G* _7 n3 l我是用的后一种方法，每次处理一大批，计数冻存，然后用的时候提前一天复苏就可以，感觉对细胞状态影响也不是太大。前一种方法每次用都要提前处理，比较麻烦。

yangpan521

楼上朋友想问问你，饲养层细胞可移冻存吗，我的做法是先用先处理，不太明白这两种有何区别，

christophe

回复 yangpan521 的帖子( A9 h5 E  |* o9 {

3 U8 c9 f5 [5 |4 z1 m6 t可以冻存的，用丝裂霉素C处理完之后正常消化冻存，细胞只是没有增殖能力了，但还是活的，所以解冻之后再用是没问题的。

lemma710

我也是用后一种方法的，灭活以后，计数冻起来，要用的时候再复苏。
' U. a. }) ~: k. n: h" G& _但是你要提前试一下你的培养皿或者培养瓶用多少数量处理过的MEF密度比较合适，以后就可以一直用这个密度了。

dilal

回复 yangpan521 的帖子+ [) z0 e- f# d# w8 g

% K: \4 b5 u/ E0 U我师兄也说是要现用现处理，说是冻存以后细胞状态会不好，但是查看了很多干细胞培养手册都是处理后再铺板，多余细胞冻存。) w# B3 p  m0 w
个人觉得现用现处理的话工作量太大了，做一个原代多次传代以后是可以得到大量的细胞的，远远超过了ESC培养所需要的细胞量。多余的细胞不冻存的话实在是浪费，孕鼠死的都有点怨。另外，MEF用于feeder以第三代细胞最好，最好不要超过6代，如果现用现处理的话，缩短了原代使用的期限。

yangpan521

回复 christophe 的帖子. F( D4 T! ^- M  o' O2 Q1 |4 V8 M+ L

* g$ L' N8 m- Y" d# Z/ B有没有比较过解冻的饲养层与现铺的区别大吗，解冻的有没有漂很多死细胞

懵懂干细胞

我一般是在P2-P3代把细胞用丝裂霉素处理之后再冻存，然后再复苏出来做饲养层，( k* v2 Y+ c8 x8 H9 |
考虑周到一点的话，可以在P1-P2代就不用丝裂霉素处理冻存一批，等要用的时候可以
4 U! q* Q" R8 R- b; h复苏出来，传一代再现处理现用，这样就可以有足够的MEF细胞用，也不会纠结冻存前处理还是冻存后处理。
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dilal

回复 懵懂干细胞 的帖子9 |/ O  p- Y. \0 A% |

0 I: {) q0 |% P8 K8 V谢谢，不错的方法，借鉴一下

christophe

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8 b( u- J8 h% P' P4 y
: `" M8 X  i1 \- s区别不大，基本上死的很少。