求端粒长度检测方法

ljj0558

我在做端粒长度的检测，有人有好的方法，能说下吗？

tigerfish

我正在做，刚刚买了Roche的TeloTAGGG Telomere length Assay.发现操作极其冗繁，正在准备中% B$ L. b1 B$ h2 l) m7 K
做出来了在和大家讨论。' D( E) V* z* ]: o+ O3 e

5 ]( z' @, t+ k# m( N$ X2 K关于产品可以参见Roche官网。

yunshi503

我 正在做 用 real-time PCR方法

grape

端粒长度的测量方法：7 A9 {# i! d' \2 t  D+ g9 I
1、DNA印迹法(Southern blot, SB)
: P4 L& \6 Z+ p4 Q" s" F/ |# K2、杂交保护分析法(hybridization protection assay,HPA)$ }; \3 ^. ~7 o
3、荧光原位杂交(FISH)
! H+ P1 C1 u7 j3 R  i5 T# x4、流式细胞计量-荧光原位杂交(Flow-FISH)
- W! p/ j( _2 B' [5、寡核苷酸引物原位DNA合成法(PRINS)/ d9 K6 j' ^+ \$ x
6、定量PCR3 P3 X5 S- x  i
7、单个端粒长度分析(STELA) 等。+ Q8 ?) `; t. t$ y7 v: L

& x1 J) V4 l  u+ D( q, ?; r总的来说,Southern blot是应用最广泛的方法, 但是针对不同的目的在测量端粒长度时还应有所选择；
% q( d  V7 f0 j流式荧光原位杂交(flow fluorescence in situ hy—bridization，Flow—FISH)是近年来发展的检测细胞端粒长度的新方法。该方法与经典的Southern印迹、定量荧光原位杂交比较，所需样品量小、细胞数少，可用于检测不分裂细胞、高通量细胞，操作快捷、灵敏度高、特异性强、重复性好，并且可区分并分析同一份标本中的不同细胞亚群，如不同免疫表型的细胞亚群，而避免预先的细胞分选过程。
2 T0 k# }5 c1 j# W, }9 ^' |) c7 u0 I$ _: Q" q: ]
具体区别详见文献：1 ]* g5 L& G4 C: D& N" s( d$ d( N

% w* O, {# Q+ A0 Y1 n

tigerfish

grape 发表于 2011-6-7 16:59
9 A* V4 y) E7 [2 ?3 J. ]端粒长度的测量方法：/ a6 {6 a+ ?: x3 a
1、DNA印迹法(Southern blot, SB)( E6 ?" l: z. f; `, F! Z# z+ p7 D9 _
2、杂交保护分析法(hybridization protection as ...

. L1 r/ d: x6 \- K
感谢

ljj0558

回复 grape 的帖子
5 [' X) I5 B9 `) r% Y3 D6 W2 M1 _: m1 J
谢谢啦啊
( N  `. c" L- _8 e

shiyi

Telomeres and Telomerase Methods and Protocols 2nd Edi 2011,供参考
- F! }- ^" D) e# g  Q, V* p9 q# P0 M" O+ I5 o; B

langziforever

其实大家可以关注一下目前高通量测序的方法，国外不是有人发明了一个克隆端粒的载体方法，其实克隆以后可选择的方法会有很多，而目前第三代测序方法可以实现超长度的测序，这样就可以精确的测得端粒的长度，以及重复序列单元，但面临的问题可能是生物信息学组装算法。这方面应该也可以开展一些单分子水平的检测方法！欢迎后续讨论！

feelchen

上完流式之后用什么软件分析结果？转换成长度。

daggercool

我很想下载 我现在也在做这方面的东西