酶切后DNA电泳能看见泳道，为何没有条带？

sniper

提取基因组后，电泳有结果。为何加完内切酶就跑不出带来了呢？哪位高手指点一二

aminhair

这个需要看图片才行!  一、确定操作无误，肯定加入了酶！没有溜号吧？  二、genome DNA 溶剂是什么，保存条件是什么？是不是降解了？可以从新电泳分析一下DNA条带。  三、酶切条件：包括温度和buffer的效率。重新检查并结合以前的实验经验再审视一下目前的结果！   祝你好运！

amosummer

有没有和没有酶切的做对照呢？还有就是检测酶是不是有效，可以切一下以前能切开的DNA对照。

jun8013

会不会切得时间太长了，长了就切碎了啊

绿雪

你做酶切的时候用了多少DNA？酶切完之后上样多少呢？上样量少的话肯定是看不到的啦。

sniper

回复 aminhair 的帖子$ M3 L1 r0 @6 k7 e7 J

3 W* V& X4 _% U酶肯定加了，用TE溶的，保存在4℃，37℃酶切。因为不好我没照相，只能看到又跑过的痕迹，但痕迹又没有超过胶的范围

sniper

回复 jun8013 的帖子+ r( A( u& k5 f8 F) [
8 g8 ]! Q/ k0 u1 P) U
请问，内切酶不是有特异性的切割为点吗？时间长会切碎吗？

sniper

回复 绿雪 的帖子; X! ~* ~: B, ?) x" W2 T9 ^1 F

; h$ X+ O% z, d7 \+ R我也是看文献做的，酶切用2微克大约20微升，上样2微升。请问这样少吗？

张也行

回复 sniper 的帖子
( f" p3 i, p0 W
0 ~+ y9 ^* o+ r你也太小气了，就切那么多，上样还那么少，多点几微升再看看。呵呵... ...

sniper

回复 张也行 的帖子0 `3 C  ~, |+ a2 D

4 y2 w7 p, S5 S- J9 V7 B" N+ P: x. ^也对哈，不过我只是忠于试剂盒的要求。谢谢啦，我试试看+ D* n7 _; R1 R; c5 A