第三天（8月17日）中午观察细胞，并消化传代

泡沫清风

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第三天中午，差不多复苏后50小时左右，观察细胞: r5 H& ]: {8 {: n8 [$ }
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+ u/ N2 K3 L: `* d不同的实验室消化传代的方法不同，我的方法可供参考：) n' p# E" [% n) c

9 \' y- y% h4 Y6 @; E实验前准备：
0 T! c! q% S2 a8 l: e- i# S（1）DMEM+10%FBS
/ d. t. j; s; A0 }2 ~: c, ?（2）PBS
4 Z9 O+ v6 q2 n: `% B6 e, A（3）0.25%胰酶
+ [8 q& ]$ ^# u+ @  Y. q9 T& ?（注：同样这些试剂要平衡到常温再做实验）
# F9 R* o9 i$ d; k. {- _: b2 I
: h( e: K. A6 j0 B/ K+ j实验步骤：
/ _; K" u( L' M3 _! u; J* P（1）弃去T75瓶中的原液。
" H1 j5 T7 R5 @! ~7 S3 n. E/ N（2）加入5mlPBS洗一遍，洗去残留的血清。" B% _. Q3 g6 C! C) o  ?
（3）加入3ml胰酶，大概常温放置1-2min。  S/ j0 S, H# R' q* K# G7 m6 |" e5 Q  T
（4）加入6ml新鲜培养基中和胰酶，并轻轻吹打内壁上的细胞。: j9 n$ _/ C" _3 [5 F# |% m  Q! f
（5）将内壁上的细胞吹打下来后，充分吹打细胞液，使其成为单细胞悬液。不过也有老师和我说不成单细胞关系也不大，3.4个细胞成团没有关系。因人而异吧，呵呵。我一般吹打50-100下。自己看着办吧，也有人吹打5-10min。
9 d/ E! g- B1 b7 V: ?7 r6 i（6）吹打成单细胞悬液后，转移到50ml离心管中。1000rpm 常温离心5min。
' U" h$ Y/ j; V; \, g（7）离心期间另外准备两个T75瓶，加上原瓶，共三个T75培养瓶，分别向瓶中加入10ml新鲜培养基。离心后，用15ml新鲜培养基重悬。充分吹打后，平均转移至三个T75瓶中。混匀。6 b' \- a& Q; M: z; r
（8）放入温箱培养。
+ F$ L* Z( ~: C. G. r$ t# E(注：我一般一个T25瓶长到80%左右传到一个T75瓶。而一个T75瓶长到80%左右传三个T75瓶，也就是1：3传。)

have-a-rest

有个问题，293培养基中需要添加丙酮酸（钠）吗？抗生素呢？) f) z/ P% E1 C7 }9 D# i6 i
一点建议：胰酶里面添加一点EDTA，也许就不需要吹打那么长时间了。

hualin840518

good

hualin840518

图片是用成像系统还是相机照的？

mvirus008

持续关注

mvirus008

有个问题请教一下：
- t4 O7 b7 e2 z这个细胞传代能否简化一下,(胰酶消化后直接加培养基把细胞吹散分装，省略掉离心再加新培养基再分装)，不知道这样行不行？

难得胡涂-1

能不能消化后先倒掉胰酶，加培养基再吹细胞？这样也不用离心啊！

泡沫清风

7# 难得胡涂-1 8 e9 s5 b) y% n/ T. w
把问题发在疑问贴里吧，这样我不用找。我的回答请到疑问贴去看吧

chenghoby

好的

轩辕之客

支持下！！！！