求教！关于小鼠iPS细胞EB培养的几个问题！

ligangtiancai

RT，本人准备做鼠iPS的悬滴法培养EB，有如下问题：
! B: K# T3 B7 A3 E8 \) Y1.用什么样的板比较合适（贴壁板/低粘附板）？
4 b7 b- J2 b+ {  h( V5 p2.接种在培养皿盖上的悬滴密度取多少？
! E, L6 h2 y5 o2 @- |: A3.悬滴之间间隔多少？/ X2 U* e# f7 K" O
4.悬滴培养时间？期间是否需要换液？
/ G  ~4 X3 \  Q! w& Q7 B6 s5.其他需要注意的地方？
3 Y  K% h1 ^9 V  U/ g% ]           先行谢过，谢谢！

mohanmud

回复 ligangtiancai 的帖子/ }4 b1 U% k# {2 ~) S  f

9 |! b* r* i7 O) R: ]6 ~2 D7 x1.用什么样的板比较合适（贴壁板/低粘附板）？
( O- D4 l: l2 r2 H) ]2 E, _5 ^4 {都没关系。5 ^0 G% V5 y8 }# L4 Z6 f, l
" u" U9 |) T8 h6 T* o8 ]; `
2.接种在培养皿盖上的悬滴密度取多少？4 N- i2 m6 S5 T1 U# d, w* _
一般500个细胞左右每滴，15-20 ul 培养基  F+ D0 \3 ?5 m2 E' ]  \5 F; |

5 M$ E) P4 D6 u9 T: y& |7 p& l3.悬滴之间间隔多少
, ~8 K2 [% x; s' h  h这个没固定要求，你操作时候只要两滴不会融合在一起就行了
, b; I- Q% y/ r% G5 z0 t
. V$ \3 c4 p/ v% Y4.悬滴培养时间？期间是否需要换液？3 S9 z/ M9 t% ~$ p, R
两天之后EB稳定了加入培养基混一起培养就行。
1 r# j' @  G4 @/ o: x7 ~, I; Y1 D5 v& H* Q
5.其他需要注意的地方
* g2 f- o2 c5 d8 g% k# s, e( s可以试着suspension EB培养，方便多了，而且达到的效果和悬滴法差不多。! w" d$ {- j# P; t5 h8 E. \9 {4 ]

刘森泉

做过的能给个详细的protocol吗？非常感谢！

shangchunhua

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$ x/ M& Q0 t# O
2 W& q1 o  B/ x. i' M% q- y, H提供两篇文献，楼主参考一下吧

ligangtiancai

回复 mohanmud 的帖子
! }. }; [' F- j* ]5 E# C0 J0 |4 U# G% K
谢谢，挺有帮助! 还有个问题，就是我想用25孔板做iPS的免疫荧光染色，不知没孔应该加多少的细胞量比较合适？谢谢

ligangtiancai

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3 a: M. ]% J, C7 `$ B, U; R, q4 j
& N9 a' O6 p  e学习一下，太感谢了！

天龙八部

学习，感谢分享！