人脐带植块培养清洗换液的问题

xuyang0317

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) B* N- U8 o7 b' K8 A, L# w) J2 ?1.将脐带去血后用pbs洗2次后尽量去水后再剪碎，洗涤后水分较大，不利于组织块贴壁；
. A. |: M8 G0 E0 ]9 c3 w- ~2.细胞能不能爬出来，我个人觉得最大原因是个人体质的原因（分离了2年的脐带经验），其次就是和您使用的培养液有关系，跟你有没有洗涤没有多少关系；
6 B) M  E2 W* U6 Y7 q' a3.组织块贴壁放入培养箱3-5小时后，直接加入含10%的FBS和EGF培养液，放置3天后观察有没有污染，没污染的话6天左右就可以看见少量细胞沿组织块周围爬出，这时候可去除组织块，全量更换新鲜完全培养液，再放置3天左右，首次传代即可。

18943340581

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- ^& K9 U4 Z. ]$ h7 K
4 Y4 u& T6 m. x' X, t% n5 Q: w1. 得到华通氏胶后，如果没有残留的血液就不需要另外冲洗了，但是如果有血液一定要将血液清洗干净，不然血细胞会影响间充质干细胞的生长。
- V$ Z4 L( i6 l; I3 X2. 我们实验室目前是 铺完组织块24h后 补4ml/皿，我们用的是100mm的皿。之后每隔3天半量换液一次，一般7天就能见细胞，16天左右就可以收集细胞了。

willow0711

回复 zhangshich 的帖子& x, s: z- m0 }$ u

7 D/ Z& c& t( y, H. O: _5 O0 C哦，谢谢
8 D: w, y+ m5 V' t/ O% B那您做是大概多久可以爬出来?多久去组织块？大概多少天可以传代

willow0711

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: E& u# u$ w) s7 `& {. h0 ~- F, @0 P! v5 K. D  x
哦，谢谢

frankhu

把华通胶剪成一平方厘米大小，均匀排列到培养载体底部，用少量的完全培养基浸润，避免组织块漂浮。放培养箱培养3个小时后，再补加培养基至刚好浸没组织块，放到培养箱中继续培养三天后全量换液（不要用平衡盐溶液清洗），首次换液要避免组织块被吹起来。一般一星期左右能看到组织块周围能看到间充质细胞爬出来。待细胞长成比较明显的区域性生长后，可以把组织块洗掉。待细胞长到80%融合后，消化传代。. n/ e/ ]  q" x; j% z: j
以上是本实验室使用的脐带间充质细胞的分离方法，仅供参考。

deshenglll

回复 willow0711 的帖子3 k# R! i* k+ ^9 }0 }' Y

. W4 S/ {8 L0 h  p0 N* Q! d洗个一两次就行了。换液最好全量换液。

mtdj1314

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" J' S- p, Y) U1 G. m- o1 [: k- F: q& w0 V& L5 n+ d
一般7天可见细胞

luyue6453

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' I. u+ z5 C: b) d/ ]% a" a3 f0 N8 ?2 H- Q! C5 l( B( L
你这细胞形态真好，不知道你需要多久能长到第三个图片那么多细胞，第四个是传代了吧！可以推荐一下培养液吗？

luyue6453

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$ @( D( ?. C  q4 v3 [7 [* E: F* A9 r, M) v" y. t+ F
你们是拨完先把组织块种到皿了？那么一条脐带种几个皿啊？等24h后再加培养液4ml的意思吗，还是种的时候就加了一些培养液？

单个核细胞

回复 luyue6453 的帖子0 g  |; D: W8 @0 H' n- f" N

, B  t8 _* L4 M1 t6 v+ F; E% E+ O从统计来看，没有添加任何细胞因子的状态下，15天左右可以长到如第3个图片（即大部分贴贴组织块周围局部细胞成致密状，第3个图片中的组织快已经脱落），可以进行传代培养。若是添加相关细胞因子，应该可以更快吧！2 c/ Q7 o$ V' N0 Z( I
$ u% A/ y3 l, X2 I  x- z, l& M
完全培养液为90% DMEM/F12（1:1）+10% FBS，均为市售商品化培养基，可以参考Gibco或者Hyclone的官网。