病毒感染细胞没有荧光，但检测有外源基因的表达

jiaocuihua123

我用pLM慢病毒载体，转染293ft细胞生产病毒，然后用其感染细胞，但是没有荧光，然后提取细胞RNA，反转录，经行PCR，发现有外源基因的表达，请问为什么会没有荧光呢，是载体出了问题吗，请大家指教。

misser217

同问……

sizhengliu

你的gfp序列是在目的基因序列后，还是前？

daviddow

我也遇到这种问题，既然有表达了就下续试验吧。可能和你载体有关，不是大公司的载体，可能就存在这种问题。

jiaocuihua123

回复 sizhengliu 的帖子7 l8 N) n- C* g5 [3 z
8 l( }" c& C$ a; g- H4 y. Q2 J
是在目的基因之后,用2A连在一起的,谢谢.

jiaocuihua123

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% r! w7 Q3 _# Y7 r4 `
: N. k- N0 A* `. |嗯,但是想用阳性的细胞做克隆,所以没有荧光的话没法保证阳性率,只能是盲做.所以很麻烦,是不是载体变异了呢?

jiaocuihua123

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8 T7 `; U  d% C# Y; C* r0 v7 n) R' [2 Y4 o
不好意思,我记错了,荧光序列是在目的系列之前,通过P2A相连.谢谢.

sizhengliu

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% M, Y" l. V, l) r6 O! Q( j* D" K9 S/ E  k8 {9 e6 x
这就可以解释了，部分载体只表达了目地序列，到gfp序列时表达已经很弱，因此，你观察不到

neuralstem

用抗体染一下可能就看见GFP了
) N2 v0 V$ N; E6 A0 F

prophe

3 e- w. H9 g) [  W. D+ ~4 _' x2 G+ o: A; Q
也有可能目的基因在细胞有本底表达，建议做一个不感染的作对照。