关于构建microRNA过表达质粒的问题

iamxuchen

最近想构建microRNA的过表达质粒，转入ES细胞看效果，各位请问用什么质粒载体较好？带GFP的还是pCDNA3.1好？我可能做好几个，直接把前体序列PCR出来插入就可以了吧？

iamxuchen

还有一个问题就是克隆出的pri-mir片段需要加上ATG的序列吗

chenzhongyan

哪位大侠赐教一下。我也打算做。现在一无所知

weiyepan

回复 iamxuchen 的帖子( h7 |/ h+ y# {# a: A- |% p+ r9 Q

" V; q3 e$ T1 i& P2 Y不用ATG的，你需要哪种miRNA，如果是人的话好多公司都有全套的，例如复能基因，你可以打个电话去问一下，那里好像自己也有载体，带GFP的也有。

xiphias

请看2004年一篇science 的文章。. C1 c' K- `* n* i: Q. e9 }+ w% M$ l
MicroRNAs modulate hematopoietic lineage differentiation
" M% V5 _9 P9 ?* P4 |/ j
' e$ W% f8 X- Q. n2 x只克隆前体序列是不会表达miR的。
2 ]- A" \: \  Y7 r不需要ATG。
' c% r6 d9 T& J) F( W  f个人觉得有GFP，或者抗性会好点。

xiphias

回复 xiphias 的帖子
, e3 `, J- X) l: o( w9 Z4 i# o# x2 q) r* ]# p+ L+ _
microRNAs modulate hematopoietic lineage differentiation..pdf (1.27 MB)

2012-4-13 17:41 上传

请用IE浏览器下载
miR表达
下载积分: 威望 -2 , 包包 -5

& W% v3 z0 [& U9 e
. P" k( I+ |: i/ u- IAll constructs with at least 40 nt on each side of the 67-nt hairpin were efficiently processed into
9 `; U# j' H4 c) ]the mature miRNA (Fig. 3B)

jkfly

我自己做用的pCDNA3.1，并且成功了。另一个没做过。

iamxuchen

jkfly 发表于 2012-4-13 18:19 - b" k) l/ y! G' j% M
我自己做用的pCDNA3.1，并且成功了。另一个没做过。

/ D: U2 Y# `$ p  r追问下，我自己做的pcDNA3.1过表达感觉效率不是很高（293里面），也就8倍多点，听别人说用T7启动子的会好很多？

茅草无敌

我也想问问就是构建pEGFP载体到底需不需要将atg放进去啊？

86964109

miRNA构建是不是U6或H1效率高啊