小鼠胚胎移植

yangpan521

哪位做过小鼠胚胎移植，并且已经成功获得健康后代的，请教有什么技巧，本人按小鼠操作指南做了几次，没有怀孕的，也不知道在那个地方出错？

zpzp0312

感觉那里做不好？

jhu132llh

1.孕鼠周期与胚胎时期大致吻合
9 z( m) O3 M% y8 ~5 w1 A6 H: R2.胚胎活率
. e( v/ k5 i5 \! Z/ R3.移植胚胎数和移植位置0 b: u# n9 F- P  @
4,品系

夜帝

目前在做冲卵，把输卵管全部和子宫一部分剪下后置于显微镜下，寻找输卵管伞端，各位大师有没有什么好的方法教我

细胞海洋

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; S( W5 J/ Y3 p% c
( f" h1 ?% _6 ]8 s& w+ H! [建议你发新帖提问

zhoujiang

你先确定胚胎是否移植进去了，可用受精卵进行移植，移植后即刻回收冲卵，如果没问题了，再考虑其它因素。

小刺猬2932056

这个要确定是否移进输卵管了，还有胚胎的质量，受体鼠大小及脂肪垫的大小等，还有操作时最好不要损伤输卵管和卵巢，好多细节需要注意，我记得刚开始好几次也都没有小鼠出生，后面多练习就好了，希望你早日成功

小刺猬2932056

回复 夜帝 的帖子4 i, r4 D# K9 K4 K4 @* K. K  f

/ ]% c7 z9 Z3 l! T4 a1 k多练，可以拿别人冲过的来练，看的多了自然就很快能找到了

huozhicb

回复 yangpan521 的帖子# J  Y+ b5 s& e; P2 i7 C5 E

. s7 J  a$ r! G6 ?. u- \你选择的是体内成熟的卵母细胞还是体外成熟的卵母细胞？二细胞移植还是囊胚移植？最好把你的实验描述清楚一点才好交流呀：" a) n6 C. O1 A5 w4 r  `9 i
1、体外成熟的卵母细胞胚胎发育能力较低，但是不管是体内成熟还是体外成熟，最好先做个胚胎培养，看看囊胚率。体内成熟+体外受精的囊胚率90%左右；体外成熟+体外受精的囊胚率50%左右应该比较容易获得后代的。) i9 q9 y& o' I2 m2 p
2、胚胎移植要的就是速度，尽量减少胚胎在体外等待的时间，我是把前期的手术操作都先做完，再去培养箱拿胚胎的。5 C! G5 r, ^  ]
3、根据不同实验组胚胎的存活率（或之前的囊胚率结果），控制好最后可能存活的后代数量（8个左右）：体内成熟+体外受精的二细胞胚胎一般移植15个胚胎；体外成熟+体外受精的二细胞胚胎一般移植20个胚胎；存活的胚胎太少的话，剩下的胚胎也会流产的。0 O* A- d- m2 J1 _" \! \- [
4、移植的时候不要注入太多的培养液，前后两端的气泡和各个胚胎紧紧相连，气泡直径不要太大，有300微米就足够了。0 d4 d, W+ X! [. b! \' }5 k3 K
5、移植结束后维持移植管的正压，避免胚胎被倒吸进移植管。

yangpan521

体外培养小鼠卵泡发育成为卵母细胞，对温度的要求高不高，请指教。