293T细胞团中央黑色不明物

telomerase

铺匀的方法有好多，个人有个人的
, e) ]$ O$ S, Y& H: s1、晃板子，就是前后晃完，左右晃，然后突然停3 A/ o& t1 z$ o1 O2 y5 w0 ~
2、先湿润板子，然后铺; B  _' a6 }1 ^( g7 v, e, B
3、直接铺，然后用枪头吹. R7 p, D1 |$ B
4、完全消化，直接加入，铺满底面就好
" E( [; K2 r2 M( [+ j3 T% A) I! B1 C3 Q! W2 _' W+ a" j& |
: N3 G; {0 v! ~3 Y
这几种我都做过，但我比较喜欢第4种
  N% g5 N) `; _你得找到你自己觉得好的方法，这些是和各自的手法有关的，没有绝对的东西

telomerase

不加双抗的$ ~4 Y' q, h2 v
转时可以用有血清的培养基，但混合质粒和lipo的最好用减血清的opti mem

telomerase

转时不要加双抗，对细胞不好8 E2 ?; Q+ Q# G  v7 k
如果6h后换液，再加不加双抗没关系了就

sizhengliu

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: w7 r* S: K9 x3 s
多谢指教！

huangcong1988

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% ?. [; U- I/ h- R8 F- O) f) `; K
个人觉得是消化传代的时候没有吹打均匀，然后传到瓶里没有摇匀，这样细胞很容易扎堆，导致细胞形态不好，还有你的细胞哪里的？是不是传代太多了？

wcfeng88

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" g) p' y! a/ e: M% B/ Y* V& _4 h- v, p. W4 D/ C. o# ^
放置几分钟，细胞仅轻轻贴壁，你拿起放到培养箱的时候的动作肯定会把它们晃起来。你可以让它们贴个半小时让它们贴壁比较紧之后再去动它，或者直接在要放的培养箱里按照常规的方法晃匀后就不动它了。

wcfeng88

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6 z) f& j+ ~' b! _8 @5 j5 ^% J1 a# a" `
质粒转染的时候不加血清，一般转染4小时之后把含质粒的转染液丢弃，再加入含血清和双抗的培养基培养就可以了。

sizhengliu

回复 wcfeng88 的帖子) w# {9 E: [& |& A9 q. P

% T0 j8 H$ g( V$ W" s/ A谢谢！

sizhengliu

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! u2 W3 K" Z1 v; `2 H. Q
) S# Y; v# R' o& k3 S谢谢！我下次试试

sizhengliu

回复 huangcong1988 的帖子8 |# J( L9 T0 w4 U. O2 R" o
  t8 q3 u+ Y$ B% N, n
我把细胞直接复苏到孔板里，或许这样太急了吧，以后可能会先在瓶里传个1、2代。