请教下关于老鼠ES细胞培养

iamxuchen

0 c+ O+ z  V0 z7 J' I这是培养的ES细胞一传二后的第二天的照片，感觉比较小- E+ @8 Q( N7 m

/ L6 p; Z* s. @这是第三天的ap染色情况，因为第一次做这个不是很有经验，想问下这个情况是大部分都分化了吗？. O- L7 n& g3 {' o% u2 c

8 c, B% ?2 B( e4 v4 @这是另外一瓶的情况染色明显比前面那瓶深，但形态也不是很好，这跟染色有关系还是细胞本身的问题？

zhusealin

mES传代的时候要消化成单个细胞，不然就会分化

牙牙丫丫123

看照片感觉有一些细胞好像分化了……而且第二张AP染色的图片显示好像在显色后你没怎么洗干净……所以在饲养层上都有一些淡淡地紫色

iamxuchen

" [8 s2 A  m1 L# S% G

牙牙丫丫123 发表于 2011-10-23 15:21
0 c3 v5 P( T; A3 O看照片感觉有一些细胞好像分化了……而且第二张AP染色的图片显示好像在显色后你没怎么洗干净……所以在饲养 ...

, H+ D. C0 [. j2 `: }/ P5 A

1 @8 L: g! T8 b# a7 B谢谢，这又是一张照相机拍下来的第一张AP染色那瓶的细胞，染上色的不多，感觉分化了基本，主要还是要把细胞传代时吹成单个哦？mef的密度有什么要求不？长的太满会不会影响啊，AP在干细胞染色的原理是什么啊？为什么会出现一个细胞染色集中在一边？谢谢~偶比较新手

牙牙丫丫123

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6 m% t" U8 ?( S3 y& U- F2 A- Y4 v# k) C
我不太清楚你用的是哪个公司的试剂盒，有一些试剂盒是需要过夜染色的。# F% [) @& o% P( L1 q
传代时是否消化成单个细胞这一说法有很多人都不一致，这主要看你们一直用什么方法培养，说消化成单个细胞是因为mES可以支持消化成单细胞的传代方法。9 \) q8 _0 g- |% r6 \% c1 u/ x% j
Feeder的密度不要太大，太大了不利于ES的生长。* D' [4 f4 @$ r7 p# U& y
而且ES传代时机要把握好，不要等ES长的太大了在传代，这样容易引起分化。
# F4 a9 s" u/ gAP染色的原理是：细胞胞浆中的碱性磷酸酶在pH9.0－9.8缓冲液中，能水解磷酸萘酚钠产生α萘酚，后者与一种稳定的偶氮盐偶联染液，沉着与细胞浆中。# z" b9 s6 m  n1 p
染色的时候着色细胞集中在一边有两种可能性：1、这些细胞没有洗干净2、克隆中仅有一部分细胞分化了，其余的细胞还没有分化，所以呈AP阳性

subenjinwo

朋友，请问这是什么细胞？

iamxuchen

回复 牙牙丫丫123 的帖子' [* g& Z5 A  [+ }- K
: [8 L1 i7 w0 L/ V
谢谢！学习到了

llecstem

回复 牙牙丫丫123 的帖子6 ^/ ~3 ~5 N' n( o
4 M* v! W& u1 R+ L$ Q+ f
你好，请教一下，mES细胞的单克隆生长的很立体，边缘也很清晰，是不是应该就是没有分化？边缘出现了泡状的细胞同时扁平了就是分化了吧？谢谢！