求助：请问这个如此肥大的是神马细胞？谢谢！

hxf_86

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; I8 ]# X6 Q# I图片中是我养的牙髓细胞。P0代的时候是梭形的，但是传代以后就越长越大，如图所示（我指图中最大的那几个细胞），然后随着传代，细胞越来越大，感觉整个铺在皿底向外延伸一样。我试过dish和flask，都是这样。消化是用0.25%胰蛋白酶-EDTA，2min。/ s5 s/ n8 z/ r3 u* I9 @
是我消化的问题么？0 v, g4 z& [% m" ?5 K# R
谢谢各位大侠

chengde266

应该是老化，消化时间过长导致。
/ T* N! @) u' Q2 {/ N单纯的0.25%胰蛋白酶可以消化2-3min，如果用0.25%胰蛋白酶-EDTA，应该不到1min就可以了。3 B  O. r$ f. V6 ?( s4 g
我们实验基本上是用0.25%胰蛋白酶，做过两次0.25%胰蛋白酶-EDTA，30s左右就可以了，你可以试试。

仁心-妙术

我养的是脐血间充质干细胞原代也出现过这种体积巨大的细胞，这些细胞呈近似多边形，胞质内见纵行排列的纹理，细胞可以相互融合。传代可以恢复原来的梭型，感觉不像老化，老化的细胞形态不规则，边界不清，增殖能力消失。

hxf_86

chengde266 发表于 2011-8-18 16:41 ' V/ r! ~  T8 r. V
应该是老化，消化时间过长导致。
, W# y& X& m2 f1 \  p) A, a单纯的0.25%胰蛋白酶可以消化2-3min，如果用0.25%胰蛋白酶-EDTA，应该不到 ...

1 z/ }& V6 B5 N3 B! ^8 i
首先感谢您的帮助。
" {0 ~+ X2 b3 U* G7 K$ u8 d我曾经试过缩短消化时间，30s，60s，90s，但是我的细胞贴壁非常牢，我吹打很久都没吹打下来（我曾经试过吹打收集中和悬液，再次加入新鲜培养基重新吹打，镜下观察还是有不少的贴壁细胞，对此我很郁闷）。
3 N6 M; T: S! ]4 i+ o+ O如果是消化时间太长的话，我缩短了消化时间，还有什么办法可以把细胞弄下来？谢谢！

hxf_86

仁心-妙术 发表于 2011-8-18 18:01
3 x) Z4 V' L+ r2 H8 A% v我养的是脐血间充质干细胞原代也出现过这种体积巨大的细胞，这些细胞呈近似多边形，胞质内见纵行排列的纹理 ...

; |  Y1 F' v+ I0 n8 o首先非常感谢您的帮助。* {, {8 i8 X# F3 ?5 r/ q5 l
我的情况跟你非常像“这些细胞呈近似多边形，胞质内见纵行排列的纹理，细胞可以相互融合。传代可以恢复原来的梭型”5 ^+ z1 f, o+ F/ n( k$ ?% [% k
我的细胞也是这样的，只是有的时候传代可以恢复，但是有的时候就恢复不了。
2 j) I" N# L6 \$ A请问您觉得这是什么细胞呢？我也是养得间充质干细胞原代的

仁心-妙术

就是MSCs可能在分化的初期形态还不稳定，原代MSCs影响因素众多接种密度、血清浓度、PH值、细胞因子的种类及添加量、滋养层细胞等，很难找出确切原因。国内外文献均为对其进行描述，如果是其他种类的细胞不会传代后表达MSCs表面抗原。

仁心-妙术

我们细胞的共同特征：原代贴壁的贴壁细胞数目少，养分相对充足，这可能是主要原因。

1301918986

这种细胞是老化了，我们养的MSC老化就是这样，细胞包体逐渐扁平宽大，细胞内出现应力纤维，一旦细胞出现这种情况几代之后细胞就会不增值了。但是是什么原因我也不清楚，有时候细胞在一二代酒出现这种情况，也很苦恼啊。

oucflora

图中的这个细胞，贴壁面积明显的大于其他细胞，细胞贴附面积增加，贴附能力增加，与基底层建立的细胞连接增多了，其分裂增殖能力可能就会下降。8 H! V# ?) w, G+ _
原代培养过程中能在体外存活的细胞，有些不具备增殖能力，有些可能增殖几代之后就停止了，这很正常，因为正常体细胞是有分裂次数限制的。

hxf_86

仁心-妙术 发表于 2011-8-19 10:02
# {& s& c% m5 _我们细胞的共同特征：原代贴壁的贴壁细胞数目少，养分相对充足，这可能是主要原因。

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我的原代组织块就很少，可能细胞数目少是个很重要的原因。
  d8 b) ~; U" V  i: \/ p如果说养分充足，是否降低血清浓度可以解决？
/ b5 h# Y. z9 N9 @2 }* w9 S) {谢谢